脂肪細胞因子在糖尿病視網膜病變發(fā)病機制中作用研究.pdf

1、第一部分脂聯素在2型糖尿病大鼠視網膜的變化 目的：復制2型DM動物模型,檢測脂聯素在2型DM大鼠視網膜的表達情況,分析重組脂聯素對其表達影響,探討脂聯素在2型DR早期發(fā)生中的作用. 方法：予以雄性SD大鼠32只高脂肪飲食(脂肪熱能接近50﹪)24周,小劑量STZ(0.5﹪,20mg/kg)腹腔注射復制出2型DM模型；隨機選取2型DM大鼠12只,重組脂聯素注射6只,健康大鼠8只作為對照,SPF環(huán)境飼養(yǎng)26周；應用Weste

2、rn蛋白印跡和RT-PCR檢測脂聯素蛋白及mRNA在正常大鼠和2型DM大鼠視網膜的變化. 結果：STZ注射 1 周后大鼠空腹血糖≥16.7mmol/L,胰島素抵抗指數明顯增高,符合2型DM成模標準；脂聯素在早期2型DM大鼠視網膜的表達較正常組顯著較少(P<0.01),注射重組脂聯素可使視網膜表達較前者明顯回升(P<0.01). 結論：采用模擬人類膳食結構的高脂肪飲食加小劑量STZ注射方法復制出的2型糖尿病大鼠模型,與臨床

3、2型DM病人發(fā)病的自然過程十分接近,是研究2型DM發(fā)病機制的理想模型；脂聯素在2型DM大鼠視網膜的含量減少提示可能與DR早期發(fā)生相關,提高視網膜的局部含量可抑制視網膜局部的炎癥反應,延緩DR早期發(fā)生。 第二部分脂源性炎癥因子在2型大鼠糖尿病視網膜病變的作用機制 目的：研究脂源性炎癥因子TNF-α IL-6及IL-18在2型DM大鼠視網膜表達變化,分析這3種脂源性炎癥因子在DR早期發(fā)生中作用,并就其與脂聯素相互的影響關系進

4、行分析,深入探討DR早期發(fā)生機制. 方法：高脂喂養(yǎng)組2型DM大鼠隨機分成2組,正常高脂喂養(yǎng)組(HF組)8只,重組脂聯素組(rHF組)6只,健康SD大鼠8只作為對照,SPF環(huán)境飼養(yǎng)28周；應用免疫組織化學從蛋白水平定性檢測了TNF-α、IL-6及IL-18在2型DM大鼠視網膜的表達變化；利用組織的原位雜交技術從mRNA水平定性分析其在2型DM大鼠視網膜的變化情況；應用病理圖象分析系統對結果進行定量分析. 結果：2型DM大鼠

5、視網膜的表達TNF-α蛋白和mRNA水平較正常組明顯增加,定量分析參數平均灰度、平均光密度、積分光密度及面密度均有顯著性差異(P<0.05,其中平均光密度P<0.01),與重組脂聯素組相比平均灰度、平均光密度、積分光密度3項參數間也有顯著性差異(p<0.05)；IL-6、IL-18蛋白和mRNA表達較正常組明顯升高,平均光密度、積分光密度及面密度等參數間有顯著性差異(P<0.05,平均灰度值P<0.01),與重組脂聯素組比較,IL-6的

6、平均光密度參數分析均有顯著性差異(P<0.05),而平均光密度、積分光密度參數在IL-18表達存在顯著性差異(P<0.05). 結論：脂源性炎癥因子TNF-α、IL-6及IL-18在早期2型DM大鼠視網膜的高表達與早期糖尿病視網膜病變發(fā)生有關,推測其促進視網膜局部炎癥反應,同時通過全身系統加重胰島素抵抗,參與早期DR發(fā)生；機體脂聯素濃度水平增加可不同程度降低這些脂源性炎癥因子的表達,延緩或防止DR的早期發(fā)生. 第三部分脂

7、肪細胞因子對血管內皮細胞的功能影響 目的：研究脂聯素和TNF-α對血管內皮細胞分泌NO、NOS等功能影響,探討其在DM血管微血管病變發(fā)生中可能作用. 方法：應用體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內皮細胞(HUVEC),檢測脂聯素對基礎狀態(tài)下和TNF-α損傷狀態(tài)下血管內皮細胞分泌:NO、NOS(包括iNOS和eNOS)影響,并以PI-3K抑制劑、NF-κB抑制劑作用組作為比較分析. 結果：HUVEC細胞在基礎狀態(tài)下,脂聯素組分

8、泌iNOS明顯降低、eNOS明顯升高,與正常對照組相比有顯著性差異(P<0.01)；PI-3K抑制組iNOS下降、eNOS升高,與兩組相比均有顯著性差異(P<0.01)rNF-α炎性損傷狀態(tài)下,HUVEC分泌NO、iNOS顯著升高,eNOS顯著降低,與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)；NF-κB抑制組NO、iNOS顯著升高,與TNF-α組相比有顯著差異(P<0.01),而eNOS無明顯改變(P>0.05)；TNF-α+脂聯素組分泌

9、NO、iNOS顯著降低,eNOS顯著升高,與TNF-α組、NF-κB抑制組相比均有顯著性差異(P<0.01)。 結論：脂聯素可促使基礎狀態(tài)下HUVEC細胞分泌大量eNOS,產生保護性NO,同時降低iNOS活性,抑制損傷性NO產生,改善血管內皮功能,脂聯素可能部分通過PI-3K途徑發(fā)揮這種作用.TNF-α通過NF-κB途徑促使HUVEC分泌iNOS,促進血管內皮的炎癥反應,脂聯素可拮抗TNF-α誘導的炎癥反應,減輕TNF-α對血管