熱休克反應(yīng)時糖皮質(zhì)激素受體mRNA減少機(jī)理的探討.pdf

1、已報道,機(jī)體及培養(yǎng)細(xì)胞在熱休克反應(yīng)時糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid receptor, GR)減少,GRmRNA也減少,但對GRmRNA減少的機(jī)理尚未進(jìn)行詳細(xì)的研究.此外,人肝癌SMMC-7721細(xì)胞中GR的含量是正常人體細(xì)胞的十幾倍.該實驗也觀察到,SMMC-7721細(xì)胞中GR的含量是骨肉瘤HOS-8603細(xì)胞的兩倍以上.因此SMMC-7721細(xì)胞是探討熱休克反應(yīng)時GR mRNA減少機(jī)理的一種較好的細(xì)胞.該實驗首先測定了

2、SMMC-7721細(xì)胞分別在45℃~52℃培養(yǎng)1h,又在37℃培養(yǎng)1h后細(xì)胞的存活率,選擇存活率在95﹪以上的溫度進(jìn)一步測定熱處理1h 37℃培養(yǎng)36h后細(xì)胞的存活率.用PCR技術(shù)從大鼠GRcDNA質(zhì)粒中及SMMC-7721細(xì)胞基因組中分別獲得大鼠GR跨外顯子(現(xiàn)人GR跨3,4,5外顯子的同源性在85﹪以上)及人GR內(nèi)含子C,E的DNA片段插入轉(zhuǎn)錄載體,以之為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄并標(biāo)記地高辛,用制備的反義RNA探針,對經(jīng)不同處理的SMMC-