滸苔多糖對小鼠腸道菌群及腸道屏障的修復(fù)作用.pdf

1、順鉑(DDP)等多種化療中使用的藥物常伴隨腹瀉、嘔吐等胃腸副反應(yīng)，嚴(yán)重限制其在臨床的使用。多項(xiàng)研究初步證明，順鉑能夠造成腸道多種屏障的損傷及紊亂。目前研究顯示，腸道屏障為腸道菌群提供微環(huán)境基礎(chǔ)，腸道菌群中的生理性細(xì)菌又構(gòu)成腸道的生物屏障。腸屏障與腸道微生物組之間存在重重聯(lián)系，我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)順鉑能夠?qū)е履c道中微生物組的失衡。如果能夠建立順鉑造成的腸道屏障損傷及腸道菌群失衡之間的聯(lián)系，將為臨床改善順鉑導(dǎo)致的腸道副作用提供理論依據(jù)。滸苔是我

2、國東部沿海居民經(jīng)常食用的綠藻，我們前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)滸苔及滸苔多糖能夠有效調(diào)節(jié)便秘小鼠腸道菌群多樣性，進(jìn)而改善便秘。
　　基于以上背景及前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，我們對小鼠進(jìn)行不同時(shí)間的順鉑處理，探究順鉑導(dǎo)致的腸道屏障損傷及腸道菌群的紊亂之間的聯(lián)系。其次用滸苔多糖對小鼠進(jìn)行預(yù)處理，探究滸苔多糖能否降低順鉑對腸道菌群及腸道屏障的破壞。
　　目的：
　　首先明確順鉑造成小鼠腸道損傷及腸道菌群紊亂的先后關(guān)系，其次對小鼠進(jìn)行滸苔多糖干預(yù)，探究

3、滸苔多糖對順鉑造成的腸道損傷是否有干預(yù)作用。
　　方法：
　　1.采用水提法提取滸苔多糖，利用多糖在60％-80％酒精中沉淀的性質(zhì)將多糖濃縮。2.動物實(shí)驗(yàn)為BALb/c小鼠，雌性，將其隨機(jī)分為三組，對照組(No)、順鉑組(DDP)、順鉑及滸苔多糖組(DDP+PEP)。首先對DDP+PEP組進(jìn)行滸苔多糖干預(yù)，1周后，用配制好的順鉑對DDP和DDP+PEP兩組小鼠進(jìn)行單次腹腔注射，劑量為14mg/kg。一部分DDP組小鼠在0、1

4、2、36及72h各時(shí)間點(diǎn)分別處死3只，每個時(shí)間點(diǎn)均收集在72h時(shí)間點(diǎn)處死的小鼠的糞便，其他小鼠在72h后處死，取血、小腸、小腸腸壁定植菌及糞便進(jìn)行研究。3.選用TdT介導(dǎo)的dUTP末端標(biāo)記法對各組小鼠的腸道上皮細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測;對16sDNA片段測序，研究各組小鼠腸道中各種細(xì)菌比例的差異;采用H&E染色技術(shù)確定腸道出現(xiàn)的病例損傷;采用免疫組化技術(shù)對小鼠小腸各個屏障的多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測。最后，將PCR-DGGE及16sDNA測序技術(shù)結(jié)合，對

5、小腸腸壁定植菌（生物屏障）進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：
　　1.注射順鉑12h后檢測到腸道中細(xì)菌比例發(fā)生變化;36h后小腸病理學(xué)出現(xiàn)損傷。2.順鉑導(dǎo)致腸內(nèi)菌群中變形菌門含量大幅增長;腸道機(jī)械屏障中上皮細(xì)胞大量凋亡;化學(xué)屏障中表達(dá)黏液蛋白的細(xì)胞數(shù)明顯減少;免疫屏障中IgA陽性細(xì)胞數(shù)減少;生物屏障中志賀菌屬豐富度增加。3.在滸苔多糖的干預(yù)下，腸道菌群紊亂情況明顯減輕，腸道各個屏障的損傷大幅度降低。小腸定植菌中乳酸桿菌明顯增加，致病菌減