辛伐他汀及氯喹調(diào)節(jié)大鼠腦創(chuàng)傷后突觸重建的研究.pdf

1、目的：探索腦創(chuàng)傷后的自噬水平神經(jīng)突觸再生之間的關(guān)系。從本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用自噬激動(dòng)劑辛伐他汀和自噬抑制劑氯喹對(duì)腦創(chuàng)傷的大鼠進(jìn)行干預(yù)，檢查藥物對(duì)大鼠海馬區(qū)的自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin-1的表達(dá)水平的影響，以PSD-95和synaptophysin指示突觸密度的高低。研究腦創(chuàng)傷后神經(jīng)功能回復(fù)的機(jī)制，為腦創(chuàng)傷后臨床治療提供新的治療靶點(diǎn)。
　　方法：按隨機(jī)原則將200只Sprague Dawley雄性大鼠分為4組：1 Sham組（n=50

2、）2 TBI組（n=50）3辛伐他汀組（n=50）4氯喹組（n=50）。每組按手術(shù)后時(shí)間1d，3d，5d及7d分成四個(gè)亞組。使用 Marmarou法，使用高空墜物打擊的方法，建立大鼠彌漫性腦損傷模型。并進(jìn)行以下各項(xiàng)檢查：1使用HE染色法顯示海馬區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)；2免疫熒光檢測(cè) LC3與 NeuN的表達(dá)定位情況；3蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白 LC3，Beclin-1和突觸蛋白 PSD-95，synaptophysin的表達(dá)水平。450只S

3、D雄性大鼠在創(chuàng)傷后3-9d行Morris水迷宮測(cè)試。用q檢驗(yàn)比較兩組間的數(shù)據(jù)，組間使用單因素方差分析，P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的界限。
　　結(jié)果：1 HE染色結(jié)果。sham組：海馬神經(jīng)元無明顯的病理學(xué)改變，神經(jīng)元清晰，整齊。TBI組：神經(jīng)元數(shù)目減少，排列稀疏，水腫，細(xì)胞周圍間隙和血管周圍間隙較sham組變寬。辛伐他汀組：神經(jīng)元數(shù)量減少較TBI組輕，輕微水腫，細(xì)胞周圍間隙和血管周圍間隙變寬較 TBI組輕。氯喹組：與 TBI

4、組相比沒有明顯區(qū)別。2大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能檢測(cè)。TBI組在傷后的各組行為學(xué)參數(shù)，逃避潛伏期變長，穿越平臺(tái)次數(shù)，平臺(tái)所在象限路程比及時(shí)間比均顯著減少。辛伐他汀組逃避潛伏期較 TBI組變短，穿越平臺(tái)次數(shù)，平臺(tái)所在象限路程比及時(shí)間比均顯著增加。氯喹組逃避潛伏期長于TBI組，穿越平臺(tái)次數(shù)，平臺(tái)所在象限路程比及時(shí)間比均減少。3 LC3 II的Western blot檢測(cè)結(jié)果。Sham組：只可以檢測(cè)到輕微量的蛋白。TBI組：LC3 II的蛋白表達(dá)

5、量與 Sham組比較，傷后1d出現(xiàn)明顯升高（P＜0.05），3d達(dá)到表達(dá)最高點(diǎn),創(chuàng)傷后7d的表達(dá)依然高于Sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：LC3 II表達(dá)創(chuàng)傷后1d和3d的表達(dá)量明顯高于TBI組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。氯喹組：LC3 II蛋白表達(dá)TBI組相比較，在傷后3d和5d表達(dá)較低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4 Beclin-1的Western blot檢測(cè)結(jié)果。Sham組：只可以檢測(cè)到輕微量的蛋白，在各時(shí)像點(diǎn)無

6、差異。TBI組：Beclin-1的蛋白表達(dá)量與Sham組比較，傷后1d出現(xiàn)明顯升高（P＜0.05），3d達(dá)到表達(dá)最高點(diǎn)，創(chuàng)傷后7d的表達(dá)依然高于Sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：Beclin-1表達(dá)隨時(shí)間變化的趨勢(shì)和TBI組類似，在創(chuàng)傷后1d,3d和5d的表達(dá)量明顯高于TBI組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。氯喹組：Beclin-1蛋白表達(dá)與時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系和TBI組類似，與TBI組相比較，在傷后3d表達(dá)較低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

7、.05）。5 PSD-95的Western blot檢測(cè)結(jié)果。Sham組：PSD-95蛋白表十分達(dá)明顯，在各時(shí)像點(diǎn)無差異。TBI組：PSD-95的蛋白表達(dá)量與 Sham組比較明顯降低，之后幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)，PSD-95的表達(dá)會(huì)有緩慢的上升，但在7d依然明顯低于sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：PSD-95表達(dá)隨時(shí)間變化的趨勢(shì)和TBI組類似，與TBI組相比，5d和7d的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。氯喹組：PSD-95蛋白表達(dá)與 TB

8、I組類似，更為緩慢，在傷后7d表達(dá)較低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。6 synaptophysin的Western blot檢測(cè)結(jié)果。Sham組：synaptophysin蛋白表達(dá)十分明顯，各時(shí)像點(diǎn)無差異。TBI組：synaptophysin的蛋白表達(dá)量與 Sham組比較明顯降低，之后幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)，synaptophysin的表達(dá)會(huì)有緩慢的上升，但在7d依然明顯低于sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：synaptophysin表達(dá)

9、隨時(shí)間變化的趨勢(shì)和TBI組類似，與TBI組相比，5d和7d的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。氯喹組：synaptophysin蛋白表達(dá)與時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系和TBI組類似，與TBI組相比較，在傷后5d和7d較低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。7 LC3與NeuN的免疫熒光檢測(cè)結(jié)果。紅色熒光顯示自噬標(biāo)記蛋白LC3的表達(dá)，綠色熒光顯示神經(jīng)元標(biāo)記物NeuN的表達(dá)。
　　結(jié)論：辛伐他汀對(duì)大鼠的彌漫性腦創(chuàng)傷有保護(hù)作用，可以顯著地提高神經(jīng)功能的