對(duì)一種源于蝸牛的殼聚糖水解酶的純化和定性.pdf

1、該論文從建立蝸牛殼聚糖內(nèi)切酶活性檢測(cè)手段入手,研究了影響酶活性的一系列因素,同時(shí)對(duì)現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了比較,確定了純化的最佳條件,設(shè)計(jì)出一套可行的實(shí)驗(yàn)方案,對(duì)蝸牛酶進(jìn)行了純化,獲得了以下結(jié)果:1.考察了蝸牛酶活性檢測(cè)方法,最終選擇對(duì)羥基苯甲酸酰肼(p-hydroxybenzonic acide hydrazidde,PAHBAH)還原糖測(cè)定方法作為酶活性的測(cè)定方法.2.為了選擇酶蛋白純化的方法,該實(shí)驗(yàn)比較了幾種常用的蛋白質(zhì)純化方法:1)

2、硫酸銨鹽析可以處理大量蛋白質(zhì),但對(duì)目標(biāo)酶蛋白純化效果不佳.2)DEAE-Sepharose離子交換層析、凝膠過濾、疏水作用層析、羥基磷灰石層析對(duì)蝸牛酶均有較好的分離效果.羥基磷灰石層析結(jié)果顯示目標(biāo)酶是中性或酸性蛋白質(zhì).3.在對(duì)各種層析方法實(shí)際效果進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)出一套較為合理而有效的純化蝸牛酶的方案.首選采用疏水作用層析,收集酶活性組分用DEAE-Sepharose 離子交換層析進(jìn)行第二步分離,活性高組分經(jīng)Sephacry1 S-