弓形蟲GRA10復合表位殼聚糖微球疫苗的實驗研究.pdf

1、弓形蟲疫苗的研究經(jīng)歷了從蟲體滅活疫苗、減毒活疫苗和基因工程疫苗的巨大飛躍。蟲體滅活疫苗安全性較高，但保護性較弱，基本沒有實用價值;減毒活疫苗具有較好的免疫力，但其存在很大的安全隱患;基因工程疫苗可安全有效刺激機體產(chǎn)生特異性的免疫應答，但受限于載體容量無法提供全面的有效保護。目前表位疫苗被認為是第四代疫苗，是新近發(fā)展起來的的疫苗研制趨勢。表位疫苗設(shè)計靈活、特異性強，直接進行人工合成的表位疫苗能夠被具有遺傳多樣性的MHC分子所識別進而提高抗

2、原遞呈效率，誘導宿主產(chǎn)生高效的體液免疫和細胞反應。
　　本課題評估了弓形蟲GRA10蛋白的優(yōu)勢表位作為弓形蟲表位疫苗的潛力。GRA10（致密顆粒蛋白10）是一種由364個氨基酸序列構(gòu)成的新型致密顆粒蛋白，參與并調(diào)節(jié)宿主細胞rRNA的合成，對蟲體在胞內(nèi)的生長與增殖扮演著重要的角色。我們通過生物信息學和免疫學方法預測篩選出了弓形蟲GRA10蛋白中的B細胞表位、CD4+T細胞表位和CD8+T細胞表位，組成弓形蟲GRA10復合表位并對其免

3、疫原性進行檢測。殼聚糖由于其生物相容性好、生物可降解易于合成和修飾加工等優(yōu)勢成為了疫苗載體和佐劑研究中的熱點。因此將復合表位用殼聚糖微球進行裝載，構(gòu)建弓形蟲GRA10復合表位殼聚糖微球疫苗。
　　通過體外誘導樹突狀細胞，觀察微球疫苗刺激樹突狀細胞抗原提成能力的改變，從而對該疫苗的免疫機制進行初步探討。通過免疫接種小鼠，檢測小鼠免疫后體液免疫和細胞免疫各項指標的水平，評估該疫苗對弓形蟲慢性感染的保護性。結(jié)果顯示，弓形蟲GRA10復合

4、表位具有更好的免疫原性，可發(fā)揮B細胞表位、CD4+T細胞表位和CD8+T細胞表位的聯(lián)合作用。進一步機制研究發(fā)現(xiàn)，弓形蟲GRA10復合表位殼聚糖微球疫苗可以有效誘導樹突狀細胞高表達表面協(xié)同刺激分子CD86和分泌更多的細胞因子，進而有效刺激淋巴細胞參與免疫應答。在小鼠免疫接種實驗表明，弓形蟲GRA10復合表位殼聚糖微球疫苗不僅可以誘導小鼠產(chǎn)生高水平的抗體IgG及IgG2a，而且可以有效的提高脾細胞的增殖水平，誘導產(chǎn)生促進CD8+T細胞亞群增