弓形蟲基因疫苗SAG1-MIC4免疫小鼠的實驗研究.pdf

1、弓形蟲是一種全球分布且廣泛寄生于人體及動物有核細胞的專性寄生原蟲，能引起人獸共患的弓形蟲病。該病的人群感染極為普遍，多數(shù)屬于隱性感染。孕婦孕期首次感染弓形蟲后可導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形。弓形蟲病也是一種常見的機會性寄生蟲病，是導(dǎo)致免疫功能嚴重低下的患者如患有惡性腫瘤、施行器官移植、長期接受放射治療、應(yīng)用免疫抑制劑以及先天性、后天性免疫缺陷者如艾滋病患者死亡的一種重要原因。此外，由弓形蟲引起的禽畜類疾病也給畜牧業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。

2、迄今尚無治療弓形蟲病的特效藥物，因此研制安全有效的疫苗極為迫切。 弓形蟲生活史較復(fù)雜，抗原成分具有發(fā)育階段的特異性或差異性。因此成功的弓形蟲疫苗應(yīng)針對多個特異性抗原，所產(chǎn)生的保護性免疫力需要針對生活史中一個以上的感染階段。SAG1為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一，具有高度的免疫原性和免疫保護性，是弓形蟲疫苗開發(fā)的主要抗原。MIC4是弓形蟲微線體分泌的一種蛋白，主要協(xié)助蟲體入侵宿主細胞，在弓形蟲生活史的所有感染階段中均有表達

3、，具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和MIC4在蟲體入侵宿主的過程中相互促進，其相應(yīng)的抗體可有效拮抗弓形蟲感染。 同時，為攻克核酸疫苗免疫效力低下的難題，我們選用霍亂毒素（Choleratoxin）A2/B亞單位（CTA2/B）的真核表達質(zhì)粒作為基因佐劑，以增強弓形蟲復(fù)合抗原基因SAG1—MIC4的免疫效果?；魜y毒素是目前常用的免疫佐劑，具有較強的粘膜免疫原性和粘膜免疫佐劑效應(yīng)，能有效增強抗原蛋白的免疫原性，同時增強機體的免疫

4、作用。CTA2/B是一種有效誘導(dǎo)Th2型（IgG，sIgA）細胞反應(yīng)為主的免疫佐劑，是粘膜免疫的有效激活劑，故可增強DNA疫苗粘膜免疫的免疫效果。 本研究首先利用PCR技術(shù)從弓形蟲基因組中獲取基因SAG1和MIC4以構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pcDNA3．1—SAG1，pcDNA3．1—MIC4及復(fù)合質(zhì)粒pcDNA3．1—SAG1—MIC4。通過轉(zhuǎn)染Hela細胞，利用RT—PCR檢測其正常轉(zhuǎn)錄及表達情況。最后利用構(gòu)建好的質(zhì)粒及佐劑pcDN

5、A3．1—CTA2/B通過粘膜免疫的方式免疫小鼠，檢測這些疫苗引起的體液免疫和細胞免疫指標。之后腹腔注射弓形蟲速殖子以觀察并研究其免疫保護性。結(jié)果正確的構(gòu)建了三種表達載體，經(jīng)RT—PCR證明各質(zhì)粒在Hela細胞中得到正確的轉(zhuǎn)錄。檢測的免疫指標證明這些質(zhì)粒均能引起很好的免疫應(yīng)答反應(yīng)。弓形蟲RH株攻擊試驗表明各疫苗對小鼠均有一定免疫保護性，且復(fù)合基因疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于單基因疫苗，并且基因佐劑CTA2/B可以對該復(fù)合基因疫苗起到很好的免疫