版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、弓形蟲是一種呈世界性分布的專性細胞內(nèi)寄生原蟲,可感染包括人類在內(nèi)的所有哺乳動物,引起人獸共患寄生蟲病。孕婦感染弓形蟲可導(dǎo)致流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn),存活者也?;加谢?、智力障礙等嚴(yán)重后遺癥。在艾滋病、惡性腫瘤、器官移植等免疫力功能低下者,感染弓形蟲是致死性病因之一。為了人類的健康和優(yōu)生優(yōu)育,研制安全有效的弓形蟲疫苗,無疑是防治弓形蟲病的重要措施。 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,弓形蟲疫苗從最早的全蟲疫苗到新近迅速發(fā)展起來的核酸疫苗均取得
2、了很大進展。雖然弓形蟲是單細胞生物,但其生活史的復(fù)雜性,形態(tài)的多樣性,入侵宿主的廣泛性,造成其不同性質(zhì)抗原的免疫性以及致病分子的機制均不相同,因此在研究有關(guān)弓形蟲疫苗的過程中,發(fā)展多種抗原組合、針對不同生活史發(fā)育階段的復(fù)合多價疫苗和核酸疫苗是研究弓形蟲疫苗過程中的一個發(fā)展方向與共識瞳。 SAGl(p30)作為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一,含量約占蟲體總蛋白的3﹪~5﹪,主要存在于弓形蟲表膜及內(nèi)膜系統(tǒng),也可分泌到蟲體外環(huán)境
3、,具有高度的免疫原性和免疫保護性,是弓形蟲感染免疫診斷和疫苗開發(fā)的主要候選抗原。 致密顆粒蛋白(dense granuleprotein,GRA)是弓形蟲侵入宿主細胞后由致密顆粒釋放入納蟲泡(parasitophorolJs’VgCIJble,PV)的一類分泌代謝抗原,目前已知至少有十種畸。由于該類蛋白在人體和實驗中具有較強的免疫反應(yīng)性和免疫原性,因而在弓形蟲病診斷及免疫預(yù)防的研究中備受關(guān)注。GRA2的抗原性很強,研究表明其在急
4、慢性弓形蟲感染者血清中普遍存在。至少存在三個B細胞表位和一個T細胞表位,可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生IgM、IgA、IgG多種抗體,激活GRA2特異的CD<,4><'+>T細胞,誘導(dǎo)機體的保護性免疫。因此GRA2作為弓形蟲病的診斷抗原及可能的疫苗成分頗具有研究價值。國外研究資料表明:SAG1和GRA2在弓形蟲特異性T輔助淋巴細胞的長期免疫機制中起重要作用,他們在弓形蟲中宿主寄生史中持續(xù)表達,從慢性感染弓形蟲患者的體內(nèi)發(fā)現(xiàn)SAG1和GRA2的特異性CD
5、<,4><'+>T細胞克隆,證明SAG1-GRA2復(fù)合基因是人類弓形蟲疫苗的重要候選基因。 本研究根據(jù)已發(fā)表的弓形蟲SAG1和GRA2基因序列,自行設(shè)計合成一對引物,PCR擴增得到SAG1和GRA2基因,并體外連接于pcDNA3.1質(zhì)粒,構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-SAGl和pcDNA3.1-GRA2,與復(fù)合基因真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-SAG1-GRA2分別瞬時轉(zhuǎn)染人成纖維細胞(HFF),轉(zhuǎn)染48小時后用Trizol提取
6、細胞總RNA,以O(shè)ligo(dT)18為引物逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA第一條鏈;對管家基因β-actin進行PCR驗證逆轉(zhuǎn)錄;然后分別對SAG1、GRA2及SAG1-GRA2基因片段進行PCR,證實真核表達載體pcDNA3.1能夠攜帶弓形蟲抗原基因SAG1、GRA2及SAG1-GRA2在哺乳動物細胞中轉(zhuǎn)錄表達。此后,用堿裂解法大量制備質(zhì)粒pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-GRA2及pcDNA3.1-SAG1-GRA2,以肌注方式接種
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 弓形蟲復(fù)合基因疫苗SAG1-ROP2-GRA2的免疫保護性研究.pdf
- 編碼弓形蟲SAG1,GRA2,GRA7和ROP16中多表位的DNA疫苗及其對BALB-c小鼠的免疫保護性研究.pdf
- 弓形蟲SAG2、GRA6、GRA7基因的重組表達及應(yīng)用研究.pdf
- 弓形蟲ROP2、SAG1基因的克隆及表達和復(fù)合基因SAG1-ROP2的構(gòu)建及表達.pdf
- 弓形蟲GRA6和SAG1基因克隆及其表達產(chǎn)物的應(yīng)用研究.pdf
- 弓形蟲基因疫苗SAG1-MIC4免疫小鼠的實驗研究.pdf
- 弓形蟲SAG1-ROP2-SAG2復(fù)合基因疫苗與免疫佐劑pmIL-12對小鼠的免疫保護性研究.pdf
- 弓形蟲SAG1-MIC8復(fù)合基因疫苗對小鼠的免疫保護性研究.pdf
- 弓形蟲表面抗原SAG3和SAG1基因的克隆表達、純化及鑒定.pdf
- 弓形蟲SAG1、MIC3單基因及SAG1-MIC3融合基因真核表達載體的構(gòu)建與鑒定.pdf
- 弓形蟲SAG5B和SAG1基因的克隆表達及其對小鼠免疫保護性研究.pdf
- 弓形蟲PAPS抗體診斷液及SAG1表達研究.pdf
- 弓形蟲SAG2基因的測序、檢測及表達.pdf
- 剛地弓形蟲GRA17、GRA23核酸疫苗及GRA17缺失株弱毒活疫苗的免疫保護性研究.pdf
- 表達弓形蟲SAG1偽狂犬病病毒的構(gòu)建及免疫研究.pdf
- 弓形蟲SAG1基因原核表達與間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 弓形蟲GRA1與HBsAg二價核酸疫苗的研究.pdf
- 弓形蟲主要抗原SAG1(P30)基因的克隆,表達及生物活性研究.pdf
- 弓形蟲SAG1-ROP2復(fù)合基因疫苗與免疫佐劑pCTA2-B及pmIL-12對小鼠的免疫保護性研究.pdf
- 弓形蟲SAG1和ROP18DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠保護性換疫的研究.pdf
評論
0/150
提交評論