2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、弓形蟲是一種呈世界性分布的專性細胞內(nèi)寄生原蟲,可感染包括人類在內(nèi)的所有哺乳動物,引起人獸共患寄生蟲病。孕婦感染弓形蟲可導(dǎo)致流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn),存活者也?;加谢?、智力障礙等嚴(yán)重后遺癥。在艾滋病、惡性腫瘤、器官移植等免疫力功能低下者,感染弓形蟲是致死性病因之一。為了人類的健康和優(yōu)生優(yōu)育,研制安全有效的弓形蟲疫苗,無疑是防治弓形蟲病的重要措施。 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,弓形蟲疫苗從最早的全蟲疫苗到新近迅速發(fā)展起來的核酸疫苗均取得

2、了很大進展。雖然弓形蟲是單細胞生物,但其生活史的復(fù)雜性,形態(tài)的多樣性,入侵宿主的廣泛性,造成其不同性質(zhì)抗原的免疫性以及致病分子的機制均不相同,因此在研究有關(guān)弓形蟲疫苗的過程中,發(fā)展多種抗原組合、針對不同生活史發(fā)育階段的復(fù)合多價疫苗和核酸疫苗是研究弓形蟲疫苗過程中的一個發(fā)展方向與共識瞳。 SAGl(p30)作為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一,含量約占蟲體總蛋白的3﹪~5﹪,主要存在于弓形蟲表膜及內(nèi)膜系統(tǒng),也可分泌到蟲體外環(huán)境

3、,具有高度的免疫原性和免疫保護性,是弓形蟲感染免疫診斷和疫苗開發(fā)的主要候選抗原。 致密顆粒蛋白(dense granuleprotein,GRA)是弓形蟲侵入宿主細胞后由致密顆粒釋放入納蟲泡(parasitophorolJs’VgCIJble,PV)的一類分泌代謝抗原,目前已知至少有十種畸。由于該類蛋白在人體和實驗中具有較強的免疫反應(yīng)性和免疫原性,因而在弓形蟲病診斷及免疫預(yù)防的研究中備受關(guān)注。GRA2的抗原性很強,研究表明其在急

4、慢性弓形蟲感染者血清中普遍存在。至少存在三個B細胞表位和一個T細胞表位,可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生IgM、IgA、IgG多種抗體,激活GRA2特異的CD<,4><'+>T細胞,誘導(dǎo)機體的保護性免疫。因此GRA2作為弓形蟲病的診斷抗原及可能的疫苗成分頗具有研究價值。國外研究資料表明:SAG1和GRA2在弓形蟲特異性T輔助淋巴細胞的長期免疫機制中起重要作用,他們在弓形蟲中宿主寄生史中持續(xù)表達,從慢性感染弓形蟲患者的體內(nèi)發(fā)現(xiàn)SAG1和GRA2的特異性CD

5、<,4><'+>T細胞克隆,證明SAG1-GRA2復(fù)合基因是人類弓形蟲疫苗的重要候選基因。 本研究根據(jù)已發(fā)表的弓形蟲SAG1和GRA2基因序列,自行設(shè)計合成一對引物,PCR擴增得到SAG1和GRA2基因,并體外連接于pcDNA3.1質(zhì)粒,構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-SAGl和pcDNA3.1-GRA2,與復(fù)合基因真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-SAG1-GRA2分別瞬時轉(zhuǎn)染人成纖維細胞(HFF),轉(zhuǎn)染48小時后用Trizol提取

6、細胞總RNA,以O(shè)ligo(dT)18為引物逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA第一條鏈;對管家基因β-actin進行PCR驗證逆轉(zhuǎn)錄;然后分別對SAG1、GRA2及SAG1-GRA2基因片段進行PCR,證實真核表達載體pcDNA3.1能夠攜帶弓形蟲抗原基因SAG1、GRA2及SAG1-GRA2在哺乳動物細胞中轉(zhuǎn)錄表達。此后,用堿裂解法大量制備質(zhì)粒pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-GRA2及pcDNA3.1-SAG1-GRA2,以肌注方式接種

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