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文檔簡介
1、第一部分:鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA緩解大鼠炎性痛
目的:觀察在炎性痛大鼠模型鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA(siRNA)后對其痛域的影響。
方法:將SPF級雌性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,體重150~180g,隨機(jī)分為6組(n=12):control組,為模型對照組;control+BDNFsiRNA組,為模型對照組+BDNF小干擾 RNA(siRNA)鞘內(nèi)給藥組;CF鞘內(nèi)注射 BDNFA組
2、,為炎性痛組;CFA+mismatch組,為炎性痛組+錯(cuò)配的siRNA鞘內(nèi)給藥組;CFA+jetPEI組,為炎性痛組+轉(zhuǎn)染劑jetPEITM鞘內(nèi)給藥組;CFA+BDNFsiRNA組,為炎性痛組+BDNFsiRNA鞘內(nèi)給藥組。將體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞分為3組:溶媒組,陰性對照組和BDNFsiRNA組,轉(zhuǎn)染后,再使用Real-Time PCR和Westernblot法篩選體外小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的BDNFsiRNA。完全弗氏佐劑(CFA)造模后1~3
3、天,分別鞘內(nèi)注射BDNFsiRNA、錯(cuò)配的siRNA及轉(zhuǎn)染劑jetPEITM,siRNA用量2.6μg/10μl,每天1次。分別于造模前及造模后隔日測定大鼠熱縮足反射潛伏期(PWLT);并于第一天注藥后連續(xù)測定24h(1h、2h、3h、4h、5h、6h、12h、24h)。然后,每組各另取4只大鼠,造模后第三天測痛。
結(jié)果: Real-Time PCR結(jié)果顯示BDNFsiRNA組的BDNFmRNA的表達(dá)低于溶媒體組和陰性對照組;
4、Westernblot結(jié)果顯示BDNFsiRNA組的BDNF表達(dá)低于溶媒體組和陰性對照組。炎性造模后第1~14天,與control組相比,CFA組、CFA+mismatch組,CFA+jetPEI組的PWLT值顯著降低;而炎性造模后第3天,與CFA組、CFA+mismatch組、CFA+jetPEI組比較,CFA+BDNFsiRNA組PWLT值顯著增高。
結(jié)論:在炎性痛大鼠模型鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA后,大鼠痛域顯著降低<
5、br> 第二部分:腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子通過脊髓Akt信號通路參與大鼠炎性痛
目的:觀察鞘內(nèi)注射BDNF小干擾RNA(siRNA)對脊髓背角BDNF的下游絲氨酸蘇氨酸激酶(Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用及在炎性痛中的可能機(jī)制。
方法:將SPF級雌性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠60只,體重150~180g,隨機(jī)分為6組(每組n=12):control組,為模型對照組;control+BDNFsiRNA組,為模
6、型對照組+BDNF小干擾RNA(siRNA)鞘內(nèi)給藥組;CFA組,為炎性痛組;CFA+mismatch組,為炎性痛組+錯(cuò)配的siRNA鞘內(nèi)給藥組;CFA+jetPEI組,為炎性痛組+轉(zhuǎn)染劑jetPEITM鞘內(nèi)給藥組;CFA+BDNFsiRNA組,為炎性痛組+BDNFsiRNA鞘內(nèi)給藥組。將體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞分為3組:溶媒組,陰性對照組和 BDNFsiRNA組,轉(zhuǎn)染后,再使用 Real-Time PCR和Westernblot法篩選體外小
7、膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的BDNFsiRNA。完全弗氏佐劑(CFA)造模后1~3天,分別鞘內(nèi)注射BDNFsiRNA、錯(cuò)配的siRNA及轉(zhuǎn)染劑jetPEITM,siRNA用量2.6μg/10μl,每天1次。每組取4只大鼠,造模后第三天處死,測定脊髓后角p-Akt表達(dá)水平(Western Blot)。
結(jié)果:大鼠炎性痛造模后第3天,脊髓后角p-Akt的蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.01);control+BDNFsiRNA組脊髓 p-Akt較對照
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