小鼠腦缺血時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞活化與細(xì)胞周期相關(guān)蛋白調(diào)控的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察小鼠局灶性腦缺血后小膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖的規(guī)律和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin D1和DCDK4的時(shí)空表達(dá)規(guī)律，探討細(xì)胞周期調(diào)控與腦缺血后小膠質(zhì)細(xì)胞活化的關(guān)系。 方法：采用線栓法制作小鼠局灶性腦缺血/再灌注模型，動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組和缺血組，缺血組在缺血40 min后根據(jù)不同的再灌注時(shí)間分為3h組，5h組，12h組，1d組，3d組和5d組。通過(guò)TTC染色和H-E染色確認(rèn)模型是否成功和腦組織的病理學(xué)改變，組織化學(xué)染色觀察小

2、膠質(zhì)細(xì)胞活化規(guī)律，免疫組織化學(xué)染色觀察cyclin D1和CDK4的表達(dá)，采用雙重染色法觀察細(xì)胞周期相關(guān)蛋白在小膠質(zhì)細(xì)胞，星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元中的表達(dá)。 結(jié)果： 1．缺血再灌注3h，小膠質(zhì)細(xì)胞在缺血中心區(qū)開(kāi)始活化，12h后，表達(dá)明顯增多(P<0.05)，缺血3d小膠質(zhì)細(xì)胞顯著增多(P<0.01)，聚集在缺血中心區(qū)與半暗帶，以圓形和阿米巴樣為主，5d后，小膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)增加。 2．在假手術(shù)組和缺血對(duì)側(cè)cyclin D

3、1和DCDK4分布較少，缺血3h，在胞核出現(xiàn)，在半暗帶和缺血中心區(qū)散在表達(dá)，1d時(shí)，cyclin D1表達(dá)達(dá)高峰，胞核深染，在半暗帶表達(dá)為主(P<0.01)，缺血中心區(qū)cyclin D1表達(dá)較5h、12h組增多，3d和5d時(shí)，cyclin D1表達(dá)下降；CDK4的表達(dá)規(guī)律同cyclin D1相類(lèi)似，CDK4在缺血3d達(dá)高峰(P<0.01)，主要在半暗帶表達(dá)，5d時(shí)表達(dá)下降。二者表達(dá)高峰早于小膠質(zhì)細(xì)胞活化高峰。 3．在小膠質(zhì)細(xì)胞中

4、cyclin D1和CDK4在1d開(kāi)始在半暗帶表達(dá)，3d時(shí)表達(dá)數(shù)量最多，缺血區(qū)和半暗帶均有表達(dá)，5d時(shí)的表達(dá)數(shù)量較3d組減少：缺血3d和5d組有部分小膠質(zhì)細(xì)胞為PCNA陽(yáng)性。 4．神經(jīng)元中cyclin D1和CDK4的表達(dá)在缺血再灌注3h、5h和12h組在半暗帶和缺血區(qū)均有表達(dá)，在1d時(shí)，NSE與cyclin D1和CDK4在半暗帶共同表達(dá)增多，3d和5d組下降。 5．星形膠質(zhì)細(xì)胞在5d組觀察到有少量cyclin D1表