醫(yī)藥工業(yè)廢水對(duì)嗜熱四膜蟲(Tetrahymena thermophila)DNA損傷的研究.pdf

1、單細(xì)胞凝膠電泳(singlecellgelelectrophoresis，SCGE)是近年來(lái)經(jīng)過(guò)不斷完善逐步發(fā)展起來(lái)的一種快速檢測(cè)單細(xì)胞水平DNA損傷的新技術(shù)。若細(xì)胞DNA受損時(shí)，其斷片會(huì)進(jìn)入凝膠中，電泳時(shí)受損片段向陽(yáng)極遷移，形成熒光拖尾現(xiàn)象，形似彗星，因此又稱彗星實(shí)驗(yàn)(cometassay)。細(xì)胞DNA受損愈嚴(yán)重，產(chǎn)生的DNA片段就愈多，在電場(chǎng)作用下遷移的DNA量也就越多，表現(xiàn)為尾長(zhǎng)的增加和尾部熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)。通過(guò)測(cè)定DNA遷移部分的

2、光密度或遷移長(zhǎng)度可定量地統(tǒng)計(jì)分析各組細(xì)胞的DNA損傷程度。由于彗星實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)便快速、需樣品量少、可檢測(cè)多種毒性物質(zhì)和適用于任何細(xì)胞類型等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于水質(zhì)監(jiān)測(cè)。
　　 嗜熱四膜蟲(Tetrahymenathermophila)作為生物材料，具有培養(yǎng)簡(jiǎn)單，生活周期短，對(duì)環(huán)境的污染物敏感等特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用嗜熱四膜蟲，結(jié)合實(shí)驗(yàn)的改良使得實(shí)驗(yàn)過(guò)程變得更加簡(jiǎn)便，從而建立快速準(zhǔn)確評(píng)價(jià)工業(yè)廢水的污染狀況的一種檢測(cè)方法。研究?jī)?nèi)容主要是通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明

3、自制模板鋪膠可以取代傳統(tǒng)鋪膠。改良的嗜熱四膜蟲彗星實(shí)驗(yàn)，與流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合檢測(cè)，以尾長(zhǎng)、尾距、olive尾距等指標(biāo)綜合分析醫(yī)藥工業(yè)廢水（氯代廢水、吸附廢水）對(duì)四膜蟲DNA損傷情況，并且比較二者遺傳毒性以及嗜熱四膜蟲彗星實(shí)驗(yàn)在其他種類工業(yè)廢水毒性檢測(cè)中的應(yīng)用。
　　 本文得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:
　　 (1)標(biāo)準(zhǔn)彗星實(shí)驗(yàn)（傳統(tǒng)鋪膠）與改良彗星實(shí)驗(yàn)（自制模板鋪膠）按常規(guī)方法操作，即培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞達(dá)對(duì)數(shù)期時(shí)，分別加入不同濃度的受試物（

4、過(guò)氧化氫），同時(shí)設(shè)相同體積的雙蒸餾水作為陰性對(duì)照組。暴露一段時(shí)間后，離心收集制成一定濃度的細(xì)胞懸液，然后制片、裂解、解旋、電泳、染色，在熒光顯微鏡下觀測(cè)結(jié)果。在相同暴露時(shí)間內(nèi)，同一H2O2濃度下DNA損傷從尾長(zhǎng)、尾距、Olive尾距上保持一致。由此可見，自制電泳槽可以取代磨砂載玻片的鋪膠法。
　　 (2)改良彗星實(shí)驗(yàn)對(duì)醫(yī)藥工業(yè)廢水的檢測(cè)，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)改良可以提高效率和穩(wěn)定性，不同稀釋倍數(shù)

5、的醫(yī)藥工業(yè)廢水所引起四膜蟲細(xì)胞DNA損傷之間呈現(xiàn)良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系，這個(gè)結(jié)果與流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)論一致。在稀釋相同倍數(shù)的情況下，吸附廢水的遺傳毒性大于氯代廢水。
　　 (3)本文利用改良彗星實(shí)驗(yàn)，對(duì)其他四類工業(yè)廢水（苯甲酸廢水、苯甲腈廢水、苯甲酸芐酯、氯堿廢水）進(jìn)行了相應(yīng)的檢測(cè)。結(jié)果表明，四種工業(yè)廢水引起四膜蟲DNA損傷的程度是不同的，其中四種廢水對(duì)嗜熱四膜蟲DNA毒性的強(qiáng)弱為:苯甲腈廢水＞苯甲酸廢水＞苯甲酸芐酯廢水＞氯堿廢水。<