牛泡沫病毒反式激活因子(Borf-1)結(jié)構(gòu)及功能的初步研究.pdf

1、該文以該實(shí)驗(yàn)室分離并鑒定的牛泡沫病毒中國毒株(BFV3026)為材料,經(jīng)PCR構(gòu)建Borf-1全長(zhǎng)及系列缺失原核表達(dá)質(zhì)粒,并利用大腸桿菌pET系統(tǒng)表達(dá)并純化Borf-1及其系列缺失蛋白.通過凝膠阻滯試驗(yàn)和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染瞬時(shí)表達(dá),探討B(tài)orf-1對(duì)兩類啟動(dòng)子的結(jié)合、激活功能.同時(shí),為探索BFV LTR、IP及Borf-1在原核細(xì)胞中的功能,該文構(gòu)建含BFV IP、LTR及其系列缺失與熒光素酶基因luc的重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coliJM1

2、09,結(jié)果表明IP不能在原核細(xì)胞中行使啟動(dòng)子功能,而BFV LTR可在原核細(xì)胞中有效啟動(dòng)luc基因的表達(dá),且啟動(dòng)區(qū)域位于-90至-125位之間.序列分析證實(shí)該區(qū)域內(nèi)存在與原核啟動(dòng)子保守區(qū)同源性很強(qiáng)的序列.質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化試驗(yàn)表明:BFV的主要調(diào)節(jié)蛋白Borf-1在E.coli中間樣可以激活其自身的LTR,蛋白N端36aa與激活作用無關(guān),其在LTR上的應(yīng)答區(qū)仍位于-310/-140之間,推測(cè)BFV的Borf-1對(duì)其LTR的激活機(jī)制普遍存在于從真