人類博卡病毒-1型啟動子分析及非結構蛋白NS1反式作用的研究.pdf

1、人類博卡病毒-1(Human bocavirus1，HBoV1)歸類于細小病毒科，細小病毒亞科，博卡病毒屬。基因組全長約5.5kb，含左端唯一啟動子，編碼兩個非結構蛋白NS1(nonstructural protein)和NP1(nuclear phosphoprotein)，兩個結構蛋白VP1(viral structural protein1)與VP2(viral structural protein2)。NP1是博卡病毒的特有蛋白

2、，對其研究已經取得一定的進展，如存在一個非典型的核定位信號，調節(jié)炎癥因子的表達，誘導細胞凋亡等等。但作為在病毒感染細胞后最先被轉錄和翻譯且對其基因組復制必須的非結構蛋白NS1，卻研究甚少。
　　本課題對我們前期研究中分離到的武漢HBoV1病毒株(pWHL-1 NCBI GeneBank: GU139423)的啟動子及NS1進行了初步研究。將全長252nt的啟動子截短突變，運用雙熒光素酶報告系統檢測各截短突變的表達活性。結果顯示，在

3、96-145nt內有一些可能的轉錄因子結合位點，對啟動子的活性有重要的影響，而146-196nt為啟動子的核心區(qū)域。對96-145nt內的部分核心元件進行點突變后，發(fā)現CAAT-box的突變會導致啟動子的活性顯著降低，而TATA-box及CREB、CdxA兩個可能的轉錄因子結合位點的突變對其活性卻無顯著影響。同樣運用雙熒光素酶報告系統探究了HBoV1的NS1對自身啟動子及轉錄因子AP-1、NF-κB、STAT3和GAS啟動子的正調控活性

4、，發(fā)現NS1的274-379aa為反式作用的關鍵性區(qū)域，AP-1、NF-κB、STAT3啟動子受NS1的調控，對GAS啟動子活性并無顯著影響。并將NS1基因全長及截短克隆到pEGFP-N1載體中，研究其在細胞內的定位，證實在180-274aa內有入核信號(NuclearImport Signal，NLS)，340-562aa內有核輸出信號(Nuclear Export Signal，NES)。
　　HBoV1啟動子的分析、NS1對