人類博卡病毒-1型啟動子分析及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1反式作用的研究.pdf

1、人類博卡病毒-1(Human bocavirus1，HBoV1)歸類于細小病毒科，細小病毒亞科，博卡病毒屬?；蚪M全長約5.5kb，含左端唯一啟動子，編碼兩個非結(jié)構(gòu)蛋白NS1(nonstructural protein)和NP1(nuclear phosphoprotein)，兩個結(jié)構(gòu)蛋白VP1(viral structural protein1)與VP2(viral structural protein2)。NP1是博卡病毒的特有蛋白

2、，對其研究已經(jīng)取得一定的進展，如存在一個非典型的核定位信號，調(diào)節(jié)炎癥因子的表達，誘導(dǎo)細胞凋亡等等。但作為在病毒感染細胞后最先被轉(zhuǎn)錄和翻譯且對其基因組復(fù)制必須的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1，卻研究甚少。
　　本課題對我們前期研究中分離到的武漢HBoV1病毒株(pWHL-1 NCBI GeneBank: GU139423)的啟動子及NS1進行了初步研究。將全長252nt的啟動子截短突變，運用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測各截短突變的表達活性。結(jié)果顯示，在

3、96-145nt內(nèi)有一些可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，對啟動子的活性有重要的影響，而146-196nt為啟動子的核心區(qū)域。對96-145nt內(nèi)的部分核心元件進行點突變后，發(fā)現(xiàn)CAAT-box的突變會導(dǎo)致啟動子的活性顯著降低，而TATA-box及CREB、CdxA兩個可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的突變對其活性卻無顯著影響。同樣運用雙熒光素酶報告系統(tǒng)探究了HBoV1的NS1對自身啟動子及轉(zhuǎn)錄因子AP-1、NF-κB、STAT3和GAS啟動子的正調(diào)控活性

4、，發(fā)現(xiàn)NS1的274-379aa為反式作用的關(guān)鍵性區(qū)域，AP-1、NF-κB、STAT3啟動子受NS1的調(diào)控，對GAS啟動子活性并無顯著影響。并將NS1基因全長及截短克隆到pEGFP-N1載體中，研究其在細胞內(nèi)的定位，證實在180-274aa內(nèi)有入核信號(NuclearImport Signal，NLS)，340-562aa內(nèi)有核輸出信號(Nuclear Export Signal，NES)。
　　HBoV1啟動子的分析、NS1對