Jembrana病毒反式激活因子Tat結(jié)構(gòu)和功能的研究.pdf

1、JDV在種屬上是典型的慢病毒，然而它卻能快速發(fā)病并導(dǎo)致很高的死亡率。JDVTat不僅能激活自身LTR，還能激活BIV和HIV兩種差異明顯的LTR，且激活能力甚至強于BIV和HIV自身Tat，目前其多效性的具體機理尚不清楚。本文以JDVTat為材料，在借鑒其他慢病毒Tat已有成果的基礎(chǔ)上構(gòu)建了近150個質(zhì)粒，對其結(jié)構(gòu)和功能進行了深入研究，試圖探索其反式激活機理及其在JDV快速致病中的作用。本文的工作主要包括以下5部分：通過逐步缺失和功能域

2、嵌合對JDVTat的結(jié)構(gòu)域進行了精確的劃分，為進一步研究其激活機理奠定基礎(chǔ)；與HIV和BIVTat對應(yīng)結(jié)構(gòu)域進行嵌合，對比各功能域的活性強弱，分析RNA結(jié)合能力對反式激活的影響；通過競爭抑制及反義轉(zhuǎn)譯試驗了解JDVTat激活中可能涉及的細胞因子，利用哺乳動物細胞雙雜交系統(tǒng)分析這些細胞因子在轉(zhuǎn)錄激活中的作用及其與Tat的關(guān)系；結(jié)合JDVTat自身結(jié)構(gòu)變化及其與LTR，細胞因子的關(guān)系推導(dǎo)其具有多效性的可能原因；確認JDVTat穿越細胞質(zhì)膜的

3、能力及其對潛伏態(tài)病毒和宿主細胞基因表達的影響，推導(dǎo)其在JDV快速發(fā)病中的具體作用。 本文首次獲得了以下具有理論價值的發(fā)現(xiàn)：①精確界定了JDVTat的激活域(15-68aa)和結(jié)合域(69-80aa)，證實了各功能域的獨立性，并發(fā)現(xiàn)N端激活域的主要功能是與CyclinT1相互作用，而C端較強的RNA結(jié)合能力是其活性強于HIV和BIVTat的主要原因；②首次發(fā)現(xiàn)其N端15個氨基酸是JDVTat通過不同模式激活HIV和BIVLTR的關(guān)