Jembrana病毒反式激活因子Tat結構和功能的研究.pdf

1、JDV在種屬上是典型的慢病毒，然而它卻能快速發(fā)病并導致很高的死亡率。JDVTat不僅能激活自身LTR，還能激活BIV和HIV兩種差異明顯的LTR，且激活能力甚至強于BIV和HIV自身Tat，目前其多效性的具體機理尚不清楚。本文以JDVTat為材料，在借鑒其他慢病毒Tat已有成果的基礎上構建了近150個質粒，對其結構和功能進行了深入研究，試圖探索其反式激活機理及其在JDV快速致病中的作用。本文的工作主要包括以下5部分：通過逐步缺失和功能域

2、嵌合對JDVTat的結構域進行了精確的劃分，為進一步研究其激活機理奠定基礎；與HIV和BIVTat對應結構域進行嵌合，對比各功能域的活性強弱，分析RNA結合能力對反式激活的影響；通過競爭抑制及反義轉譯試驗了解JDVTat激活中可能涉及的細胞因子，利用哺乳動物細胞雙雜交系統分析這些細胞因子在轉錄激活中的作用及其與Tat的關系；結合JDVTat自身結構變化及其與LTR，細胞因子的關系推導其具有多效性的可能原因；確認JDVTat穿越細胞質膜的

3、能力及其對潛伏態(tài)病毒和宿主細胞基因表達的影響，推導其在JDV快速發(fā)病中的具體作用。 本文首次獲得了以下具有理論價值的發(fā)現：①精確界定了JDVTat的激活域(15-68aa)和結合域(69-80aa)，證實了各功能域的獨立性，并發(fā)現N端激活域的主要功能是與CyclinT1相互作用，而C端較強的RNA結合能力是其活性強于HIV和BIVTat的主要原因；②首次發(fā)現其N端15個氨基酸是JDVTat通過不同模式激活HIV和BIVLTR的關