蛋白質(zhì)微陣列生產(chǎn)用瓊脂糖修飾玻片制備的條件優(yōu)化.pdf

1、目的：蛋白質(zhì)微陣列載體的選擇和表面修飾是影響微陣列質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一，蛋白質(zhì)微陣列載體不但要能固定足夠量的蛋白質(zhì)還要使固定在其表面的蛋白質(zhì)保持天然活性。在過去的研究中發(fā)現(xiàn)，瓊脂糖膜具有三維多孔結(jié)構(gòu)，經(jīng)過水化后在其內(nèi)部形成了固-液狀態(tài)的水凝膠結(jié)構(gòu)，這種三維、多孔結(jié)構(gòu)以及濕潤的微環(huán)境不但能固定足夠的蛋白質(zhì)同時(shí)可以防止蛋白質(zhì)變性失活。該實(shí)驗(yàn)的目的就是以瓊脂糖修飾的玻片作為蛋白質(zhì)微陣列載體，建立一種以瓊脂糖修飾玻片為載體的蛋白質(zhì)微陣列制備的優(yōu)化

2、方法。并比較瓊脂糖修飾玻片和醛基修飾玻片以及氨基修飾玻片對蛋白質(zhì)固定效率的優(yōu)劣。 方法：配制不同濃度的瓊脂糖溶液，加熱沸騰后鋪在潔凈的玻片上，烘箱烤干后制成微陣列載體。將羊IgG固定在經(jīng)過活化的載體表面，經(jīng)過洗滌、封閉，再加入Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgG，孵育，洗滌后用共聚焦激光掃描儀獲取圖像，檢測各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng)度確定最佳瓊脂糖濃度，最佳NaIO4濃度，最佳固定時(shí)間以及封閉時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件，并和醛基修飾表面以及氨基修飾表