蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)在檢測(cè)TORCH感染中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：對(duì)玻片表面六種不同修飾方法進(jìn)行比較，探討制備蛋白質(zhì)微陣列的合適的玻片表面修飾方法；研究分別采用熒光素和膠體金為檢測(cè)信號(hào)制備TORCH感染檢測(cè)蛋白質(zhì)微陣列。 方法：以玻片為基質(zhì)，采用六種不同方法對(duì)玻片表面進(jìn)行修飾，對(duì)其接觸角進(jìn)行測(cè)量，采用原子力學(xué)顯微鏡對(duì)其表面進(jìn)行表征，通過(guò)將不同濃度的人IgM點(diǎn)樣于修飾后的玻片制備蛋白質(zhì)微陣列，比較不同修飾方法對(duì)蛋白質(zhì)的固定效率，以及檢測(cè)的線性范圍、背景等；采用玻片表面修飾瓊脂糖膜制備蛋白質(zhì)

2、微陣列，以生物素標(biāo)記二抗，利用生物素和鏈霉親和素的強(qiáng)大親和力，檢測(cè)血清中TORCH IgM抗體；抗原點(diǎn)樣于被瓊脂糖膜修飾的玻片表面，將膠體金標(biāo)記的抗體和微陣列進(jìn)行孵育，采用銀加強(qiáng)放大微陣列信號(hào)，肉眼觀察或普通的平板掃描儀記錄結(jié)果。 結(jié)果：測(cè)量修飾后的玻片的接觸角，對(duì)玻片表面進(jìn)行表征，對(duì)蛋白質(zhì)的固定效率、固定的效果進(jìn)行綜合分析，瓊脂糖修飾玻片的表面接觸角較大，其表面不儀有多孔結(jié)構(gòu)，而且有一定厚度，結(jié)合蛋白質(zhì)分子的能力最大，其點(diǎn)的

3、變異度較小，沒(méi)有拖尾現(xiàn)象，點(diǎn)較圓潤(rùn)，背景較低；以熒光為檢測(cè)信號(hào)，基于生物素一鏈霉親和素系統(tǒng)制備的TORCH感染檢測(cè)蛋白質(zhì)微陣列，IgM的最低檢出量為0.25pg，蛋白質(zhì)微陣列和ELISA法同時(shí)對(duì)CMV、RV、TOX和HSV II IgM抗體總的檢測(cè)診斷符合率為97.1﹪；采用免疫金銀染色法制備的TORCH感染檢測(cè)蛋白質(zhì)微陣列，IgM的最低檢出量為12.5pg，微陣列和ELISA法同時(shí)對(duì)CMV、RV、TOX和HSVIIIgM抗體總的檢測(cè)診