流體切應(yīng)力對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞遷移與增殖的影響及其機(jī)制.pdf

1、血管重建（remodeling）是指機(jī)體在生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老和疾病等過程中，血管為適應(yīng)體內(nèi)外環(huán)境的變化而發(fā)生的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的改變。力學(xué)因素在血管重建中起著重要作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells，ECs）和血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）是血管的主要組成細(xì)胞。ECs和VSMCs的遷移與增殖異常是心血管病血管重建的主要特征之一。然而，力學(xué)因素對(duì)血管重建的影響是一個(gè)十分

2、復(fù)雜的調(diào)控系統(tǒng)，流體切應(yīng)力調(diào)控血管重建的力學(xué)生物學(xué)機(jī)制仍未完全闡明。因此，研究切應(yīng)力對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)ECs及VSMCs遷移與增殖的影響及其機(jī)制，對(duì)于深入了解心血管活動(dòng)和心血管疾病發(fā)生的本質(zhì)，尋求心血管疾病防治的新措施具有重要的理論和臨床意義。
　　本文首先在我們前期力學(xué)－血管蛋白質(zhì)組學(xué)研究，得到低切應(yīng)力條件下血管組織Rab28蛋白表達(dá)明顯升高的結(jié)果基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討Rab28蛋白在低切應(yīng)力調(diào)控血管細(xì)胞遷移中的作用。應(yīng)用ECs與VSMCs

3、聯(lián)合培養(yǎng)模型及平行平板流動(dòng)腔系統(tǒng)，分別施加5 dyn/cm2低切應(yīng)力和15 dyn/cm2正常切應(yīng)力，加載時(shí)間為12 h，以靜態(tài)ECs與VSMCs聯(lián)合培養(yǎng)為對(duì)照組，用Western blotting檢測(cè)Rab28和p-ERK表達(dá)的變化；Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移；RNA干擾阻斷Rab28，以探討低切應(yīng)力對(duì)VSMCs遷移的影響及其機(jī)制。
　　然后，我們進(jìn)一步研究正常切應(yīng)力及 VSMCs單獨(dú)及協(xié)同對(duì)ECs增殖的影響。對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)的

4、ECs與VSMCs施加15 dyn/cm2正常切應(yīng)力，加載時(shí)間為12 h，以未施加切應(yīng)力的ECs與VSMCs靜態(tài)聯(lián)合培養(yǎng)、ECs與VSMCs隔開靜態(tài)培養(yǎng)為對(duì)照組；同時(shí)對(duì)單獨(dú)培養(yǎng)的ECs施加15dyn/cm2正常切應(yīng)力，加載時(shí)間12 h，以靜態(tài)單獨(dú)培養(yǎng)ECs為對(duì)照組，用Western blotting方法檢測(cè)反映細(xì)胞增殖能力的分子PCNA和信號(hào)分子p-Akt的表達(dá)變化。
　　結(jié)果顯示：①低切應(yīng)力明顯地誘導(dǎo)了聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs的遷移、

5、Rab28蛋白表達(dá)和ERK磷酸化；②低切應(yīng)力促進(jìn)了聯(lián)合培養(yǎng)ECs的ERK磷酸化；③靜態(tài)條件下，SiRNA干擾抑制Rab28的活性表達(dá)，對(duì)ECs和VSMCs的ERK磷酸化無影響，卻能夠顯著地下調(diào)它們的遷移能力；④ ECs與VSMCs聯(lián)合培養(yǎng)、ECs與VSMCs隔開培養(yǎng)均明顯地誘導(dǎo)了ECs的PCNA蛋白表達(dá)并上調(diào)了Akt磷酸化；⑤正常切應(yīng)力加載降低了VSMCs誘導(dǎo)的ECs的PCNA蛋白表達(dá)及Akt磷酸化；⑥ TGFβ1封閉性抗體抑制了隔開培