白細胞介素-22對小鼠急性重癥胰腺炎相關肺損傷的保護作用.pdf

1、目的：研究白細胞介素-22在大劑量L-精氨酸誘導的急性重癥胰腺炎相關肺損傷小鼠中發(fā)揮的作用，并進一步探討其介導的信號通路。
　　方法:健康雄性Balb/c小鼠，總共72只，隨機分成4組:正常對照組（NaCl組，12只）、急性重癥胰腺炎模型組（SAP組，36只）、治療對照組（PBS組，12只）和治療組（rIL-22組，12只）。其中，模型組又隨機分為造模后24h、48h和72h3個亞組（每亞組12只）。用20％L-精氨酸分2次腹腔注

2、射（各4mg/g體質量，間隔1h）誘導小鼠急性重癥胰腺炎模型。正常對照組小鼠腹腔注射相同體積0.9％NaCl溶液。治療對照組和治療組小鼠在L-精氨酸腹腔注射前后分5次（200ng/次）在固定時間點分別利用PBS或rIL-22進行皮下注射。觀察各組小鼠一般情況，并記錄治療對照組和治療組小鼠的存活率。測定各組小鼠血清淀粉酶、肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性、胰腺和肺臟的濕/干質量比率，蘇木精伊紅(HE)染色后對胰腺和肺組織進行病理學檢查。R

3、eal-time PCR和Westernblotting分別檢測各組小鼠肺組織Bcl-2、Bcl-xL和IL22RA1mRNA的水平以及治療對照組和治療組小鼠肺組織p-STAT3和總STAT3蛋白的表達。
　　結果:1.各組小鼠一般情況及PBS和rIL-22組小鼠的存活率
　　NaCl組小鼠一般情況正常;SAP組與PBS組小鼠活動明顯減少、弓背、豎毛、反應遲鈍、精神極差、頻繁飲水;rIL-22組活動量無明顯變化，精神稍差，反

4、應尚靈活，存活率100.0％(12/12)高于PBS組存活率66.7％(8/12)(P＜0.05)。
　　2.各組小鼠血清淀粉酶活性的變化
　　NaCl組血清淀粉酶活性未見明顯變化;SAP組3個時間點小鼠的血清淀粉酶活性均高于NaCl組（P均＜0.05），且在造模后48 h最高;rIL-22組小鼠的血清淀粉酶活性顯著低于PBS組(P＜0.05)。
　　3.各組小鼠肺組織MPO活性
　　與NaCl組比較，SAP組3

5、個時間點小鼠肺組織MPO活性隨時間延長呈逐漸升高趨勢(P均＜0.05);rIL22組小鼠肺組織MPO活性明顯低于PBS組(P＜0.05)。
　　4.各組小鼠胰腺和肺臟濕/干質量比率
　　與NaCl組比較，SAP組3個時間點小鼠胰腺和肺臟濕/干質量比率隨時間延長呈逐漸升高趨勢（P均＜0.05）;與PBS組比較，rIL-22組小鼠胰腺和肺臟濕/干質量比率均顯著降低（P均＜0.05）。
　　5.各組小鼠胰腺和肺組織病理學改變

6、
　　肉眼觀察，NaCl組小鼠胰腺未見明顯變化。SAP組:造模后24h和48h，胰腺明顯腫脹，體積增大，色澤變暗;造模后72h，胰腺變?yōu)榛野咨w積較NaCl組明顯縮小，部分胰腺包膜下可見散在出血點，大網膜和腸系膜根部有大量的皂化斑，部分腸壁充血水腫，腸管顯著擴張，腹腔內有血性積液形成。HE染色鏡下觀察，NaCl組胰腺小葉及間質結構完整，紋理清晰，腺泡細胞形態(tài)正常、排列整齊，幾乎無水腫和出血壞死，無明顯炎癥細胞浸潤。SAP組:造模

7、后24h，胰腺可見明顯的間質水腫，腺泡細胞呈點狀壞死，并伴少量炎性細胞浸潤，未見胰腺導管的損傷;造模后48h，胰腺腺泡嚴重破壞，間質水腫和炎性細胞浸潤較造模后24h明顯加重;造模后72h，胰腺損傷最明顯，腺泡及小葉結構模糊不清，70-80％腺泡細胞被破壞，部分被脂肪組織填充，血管被消化，可見大片狀出血，并伴有大量炎性細胞的浸潤。PBS組胰腺病理損傷與SAP組造模后72h比較無明顯差異。而rIL-22組小鼠胰腺的間質水腫，小葉間隙增寬、腺

8、泡細胞腫脹、出血、壞死和炎癥細胞浸潤較PBS組均明顯減輕。
　　肉眼觀察，NaCl組肺臟結構大體正常。SAP組與PBS組肺臟明顯腫脹伴出血。rIL-22組肺水腫和壞死不明顯。HE染色鏡下觀察，NaCl組肺臟未見明顯病理變化。SAP組:造模后24h和48h，肺損傷不明顯，僅見輕微充血和間質水腫，有少量的炎性細胞浸潤;造模后72h，肺組織可見明顯損傷，肺泡壁出現局灶性增厚，肺泡間隔增寬，肺間質充血水腫，毛細血管擴張、充血，并可見灶性或

9、片狀出血、壞死，肺泡間隔及肺泡腔內均有大量的炎性細胞浸潤。PBS組肺臟病理損傷與SAP組造模后72h比較無明顯差異。而rIL-22組小鼠肺組織間質充血水腫、肺泡壁局灶性增厚、肺泡間隔增寬及炎癥細胞浸潤與PBS組比較，均得到明顯改善。
　　6.各組小鼠肺組織Bcl-2、Bcl-xL和IL-22RA1 mRNA的表達
　　與NaCl組比較，SAP組3個時間點小鼠肺組織Bcl-2和Bcl-xLmRNA的表達水平隨時間延長呈逐漸降低

10、趨勢（P均＜0.05），而IL-22RA1 mRNA的表達水平在3個時間點均升高（P＜0.05），并于造模后48h達到峰值。與PBS組比較，rIL-22組小鼠肺組織Bcl2、Bcl-xL和IL-22RA1 mRNA的表達水平顯著升高（P均＜0.05）。
　　7.PBS和rIL-22組小鼠肺組織p-STAT3及總STAT3蛋白的表達
　　與PBS組比較，rIL-22組肺組織p STAT3蛋白的表達水平明顯升高，而總STAT3蛋