腹腔穿刺引流對重癥急性胰腺炎相關(guān)肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　首先制備重癥急性胰腺炎大鼠模型并對其進(jìn)行APD治療，研究APD對胰腺炎相關(guān)肺損傷嚴(yán)重程度的影響。然后，通過將離心后的PAAF上清液逆行注射到輕型胰腺炎大鼠腹腔內(nèi)，觀察PAAF中α-amylase對腸道內(nèi)皮細(xì)胞XDH解離的作用和對肺組織XOD活性的影響。檢測通過APD去除SAP大鼠的PAAF后，XDH從腸道內(nèi)皮細(xì)胞上解離和向XOD轉(zhuǎn)化水平的變化，探討APD對肺組織XDH和XOD活性的影響。最后觀察APD對肺組織內(nèi)氧化應(yīng)激

2、和P-選擇素表達(dá)水平以及白細(xì)胞浸潤程度的影響，探討APD通過降低氧化應(yīng)激水平對APALI的治療作用及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法及結(jié)果：
　　第一部分:腹腔穿刺引流(APD)對重癥急性胰腺炎(SAP)相關(guān)肺損傷的保護(hù)作用研究
　　目的:
　　觀察APD對SAP大鼠總體治療效果和肺組織的保護(hù)作用
　　方法:
　　1.APD對SAP大鼠死亡率的影響
　　為觀察APD對SAP大鼠死亡率的影響，選用42只

3、SD雄性大鼠，隨機(jī)分入3組（每組14只），分別為:(1)假手術(shù)組（Sham group）;(2)重癥急性胰腺炎組(SAP group);(3)重癥急性胰腺炎引流組(SAP+APD group)。采用從胰膽管位于十二指腸壁內(nèi)的開口逆行向胰腺內(nèi)注射5％?；悄懰徕c的方法，制作SAP大鼠模型。造模成功后，常規(guī)方法消毒、關(guān)腹，通過皮下注射一定量生理鹽水補(bǔ)液。假手術(shù)組大鼠在開腹后僅翻動胰腺組織后即關(guān)腹。APD引流組大鼠在SAP大鼠造模結(jié)束后，于右下

4、腹放入“十字花”型引流管，腹腔內(nèi)引流管長約0.5cm，外接負(fù)壓引流球，然后消毒關(guān)腹。觀察記錄術(shù)后12小時大鼠的情況，并記錄死亡率。12小時后處死存活大鼠，收集所有腹水，計量腹水量。
　　2.APD對SAP相關(guān)肺損傷的保護(hù)作用
　　36只SD雄性大鼠，分為(1)假手術(shù)組（Sham group）;(2)重癥急性胰腺炎組(SAPgroup);(3)重癥急性胰腺炎引流組(SAP+APD group)，各組造模方法同前，術(shù)后3小時人性

5、化處死動物，再取血清、腹水和胰腺、肺組織及肺泡灌洗液進(jìn)行以下實驗:血清α-amylase、trypsin活性測定;肺組織大體、顯微鏡下組織病理變化（HE染色）和病理評分，肺組織干濕重比（稱量計算法）計算。
　　結(jié)果:
　　1.SAP組大鼠的12h死亡率為57.1％，平均腹水量為(10.1±1.3 ml); SAP+APD組大鼠的12h死亡率為14.3％，平均腹水量為(7.0±0.9ml)，均顯著低于SAP組。
　　2.

6、SAP組大鼠血清α-amylase、trypsin比Sham組的大鼠血清含量明顯升高;SAP+APD組的大鼠血清α-amylase、trypsin活性較SAP組大鼠血清內(nèi)α-amylase、 trypsin活性明顯下降。
　　3.三組大鼠的肺組織大體、組織學(xué)觀察及病理評分情況:SAP組大鼠肺組織在術(shù)后3小時可見明顯出血、壞死，炎性細(xì)胞浸潤。與Sham組大鼠相比，肺組織病理損傷評分明顯增高，干濕比例增高;SAP+APD組大鼠肺組織病

7、理評分和干濕重比較SAP組大鼠的肺組織病理評分和干濕重比明顯下降。
　　小結(jié):
　　以上結(jié)果說明APD對SAP大鼠具有明顯的治療效果，可減少循環(huán)中胰酶水平，降低大鼠死亡率。APD對胰腺炎相關(guān)肺損傷具有保護(hù)作用，可以減少細(xì)胞壞死、出血水平，降低肺組織水腫程度。
　　第二部分:XDH/XOD在APD保護(hù)SAP相關(guān)肺損傷中的作用研究
　　目的:
　　觀察APD對肺組織XDH/XOD活性和氧自由基水平變化的影響

8、r>　　方法:
　　1.APD對肺組織內(nèi)XDH和XOD活性及氧自由基水平的影響
　　36只SD雄性大鼠，分為(1)假手術(shù)組（Sham group）;(2)重癥急性胰腺炎組(SAPgroup);(3)重癥急性胰腺炎引流組(SAP+APD group)，各組造模方法同前。術(shù)后3小時人性化處死大鼠，取肺組織，檢測:肺組織XOD及XDH活性(ELISA)，并測定肺組織SOD活性及MDA水平（分光光度法）。
　　2.PAAF中α

9、-amylase對腸道XDH解離和轉(zhuǎn)化水平的影響
　　24只SD雄性大鼠，采用腹腔注射蛙皮素的方法制作輕型胰腺炎模型后，隨機(jī)分為三組（每組8只）:(1)對照組(Controls);(2)PAAF腹腔注射組(PI);(3)PAAF+α-amylase抑制劑注射組(DPI)。術(shù)后3小時人性化處死大鼠，取回腸末端、血清，進(jìn)行以下檢測:腸道內(nèi)皮細(xì)胞XDH及XOD活性（免疫組化和ELISA）測定，血清XDH及XOD活性(ELISA)測定。<

10、br>　　3.APD對腸道內(nèi)皮細(xì)胞XDH解離和轉(zhuǎn)化水平的影響
　　36只SD雄性大鼠，分為(1)假手術(shù)組（Sham group）;(2)重癥急性胰腺炎組(SAPgroup);(3)重癥急性胰腺炎引流組（SAP+APD group），各組造模方法同前，術(shù)后3小時人性化處死大鼠，取回腸末端、血清，進(jìn)行以下檢測:腸道內(nèi)皮細(xì)胞XDH及XOD活性(免疫組化和ELISA)測定，血清XDH及XOD活性(ELI SA)測定。
　　小結(jié):

11、r>　　1.與Sham組相比，SAP組大鼠肺組織內(nèi)XDH和XOD活性明顯增高，而早期腹腔引流后的SAP+APD組大鼠肺組織內(nèi)XDH和XOD活性較SAP組的大鼠肺組織內(nèi)活性明顯降低。與Sham組比較，SAP組大鼠肺組織內(nèi)氧化代謝產(chǎn)物MDA水平升高，氧自由基清除酶SOD的活性下降，經(jīng)過早期腹腔引流后，SAP+APD組的大鼠較SAP組大鼠肺組織內(nèi)MDA水平明顯降低，SOD活性顯著升高。
　　2.腹腔注射PAAF的輕型胰腺炎大鼠與對照組輕

12、型胰腺炎大鼠和注射PAAF+α-amylase抑制劑的輕型胰腺炎大鼠相比，血清內(nèi)XDH和XOD的活性水平顯著增高，腸道血管內(nèi)皮細(xì)胞表面XDH的活性明顯降低，XOD的活性稍有升高。
　　3.免疫組化和Elisa檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SAP組大鼠腸道血管內(nèi)皮細(xì)胞表面XDH的活性水平較Sham組大鼠活性水平明顯下降，XOD活性水平較sham組大鼠活性水平稍有升高，血清內(nèi)XDH及XOD的活性水平較sham組大鼠血清明顯上升。經(jīng)過腹腔引流后，SAP

13、+APD組大鼠腸道內(nèi)皮細(xì)胞表面XDH活性水平較SAP組大鼠腸道內(nèi)皮細(xì)胞活性水平升高，XOD稍有降低，血清內(nèi)XDH和XOD活性水平較SAP組大鼠明顯下降。
　　小結(jié):
　　APD通過減少腹水的重吸收，抑制α-amylase對腸道內(nèi)皮細(xì)胞表面XDH解離的促進(jìn)作用，降低循環(huán)中XDH向XOD的轉(zhuǎn)化，從而減少肺組織XOD活性和氧自由基水平。
　　第三部分:p-選擇素在APD保護(hù)SAP相關(guān)肺損傷中的作用研究
　　目的:

14、>　　探討APD通過降低P-選擇素表達(dá)水平對胰腺炎相關(guān)肺損傷的保護(hù)作用
　　方法:
　　共使用36只SD雄性大鼠，隨機(jī)分為(1)假手術(shù)組(Sham group);(2)重癥急性胰腺炎組(SAP group);(3)重癥急性胰腺炎引流組(SAP+APD group)。各組造模方法同前，術(shù)后3小時人性化處死大鼠，取肺組織進(jìn)行以下檢測:肺組織內(nèi)P-選擇素表達(dá)水平變化(real-timePCR及western blot)測定，肺組織

15、MPO（ELISA法）活性測定，計數(shù)肺泡灌洗液內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　1.與sham組相比，SAP組大鼠肺組織內(nèi)P-選擇素表達(dá)水平顯著增高，早期腹腔引流后的SAP+APD大鼠肺組織內(nèi)P-選擇素較未治療的SAP組大鼠表達(dá)水平明顯降低。
　　2.SAP組的大鼠肺泡灌洗液內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量以及肺組織的MPO活性，較Sham組大鼠肺泡灌洗液內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量和肺組織內(nèi)MPO活性明顯增高。而SAP+APD組大鼠肺泡灌洗液

16、內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量以及肺組織的MPO活性，較SAP組明顯降低。
　　小結(jié):
　　APD可以降低重癥急性胰腺炎肺組織內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物水平，降低肺組織內(nèi)的P-選擇素表達(dá)水平，從而減少肺組織內(nèi)白細(xì)胞浸潤程度。
　　全文總結(jié)：
　　1.肺組織血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的P-選擇素在白細(xì)胞的黏附、遷移中起到了重要的作用，而XOD來源的氧自由基可以上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素的表達(dá)水平。重癥急性胰腺炎時，活性增高的XOD通過上調(diào)P-選擇素表

17、達(dá)促進(jìn)白細(xì)胞向肺組織內(nèi)的遷移，加重肺損傷嚴(yán)重程度。采用將PAAF通過腹腔注射給輕型胰腺炎大鼠的方法，可以觀察到輕型胰腺炎大鼠腸道內(nèi)皮細(xì)胞表面的XDH的解離和轉(zhuǎn)化增加，循環(huán)中及肺組織內(nèi)的XDH和XOD活性明顯增高，而α-amylase抑制劑可以拮抗這種現(xiàn)象，說明PAAF內(nèi)的α-amylase通過腹膜等途徑重吸收后，可以促進(jìn)腸道內(nèi)皮細(xì)胞表面的XDH解離和轉(zhuǎn)化，明顯增加循環(huán)中XDH和XOD活性，加重肺損傷。
　　2.腹腔穿刺引流通過早期