綿羊卵母細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中核相變化及皮質(zhì)顆粒分布特征研究.pdf

1、卵母細(xì)胞在體內(nèi)的發(fā)育是個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程。到目前為止，對(duì)于綿羊卵母細(xì)胞成熟調(diào)節(jié)的機(jī)制尚未完全清楚，從而制約了綿羊卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)質(zhì)量的進(jìn)一步提高。本研究通過(guò)對(duì)綿羊有腔卵泡中的卵母細(xì)胞及其在體外成熟過(guò)程中細(xì)胞核核相及皮質(zhì)顆粒的分布特征進(jìn)行研究，探索了綿羊卵母細(xì)胞細(xì)胞核成熟、細(xì)胞質(zhì)成熟的變化規(guī)律。
　　用地衣紅染色方法觀察綿羊早期有腔卵泡（1 mm≤直徑≤2.5 mm）與中期有腔卵泡(2.5 mm＜直徑≤7.5 mm)中卵母細(xì)胞的核

2、相特征，用FITC-PNA、Hoechst33342雙染方法觀察兩組綿羊卵泡中處于不同核相時(shí)期的卵母細(xì)胞的皮質(zhì)顆粒分布特征，結(jié)果表明:成年綿羊早期和中期有腔卵泡中的絕大部分卵母細(xì)胞處于GⅤ期的不同階段，中期有腔卵泡中卵母細(xì)胞的核成熟進(jìn)程比早期有腔卵泡中卵母細(xì)胞的核成熟進(jìn)程靠后;早期有腔卵泡與中期有腔卵泡中卵母細(xì)胞的皮質(zhì)顆粒分布類型相同，且各類型所占比例無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　用FITC-PNA、Hoechst33342

3、雙染方法研究不同直徑綿羊卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞以及體外成熟過(guò)程中綿羊卵母細(xì)胞的核相及皮質(zhì)顆粒分布特點(diǎn)，結(jié)果表明:隨著綿羊卵母細(xì)胞核成熟進(jìn)程的發(fā)展，其皮質(zhì)顆粒的分布與遷移也發(fā)生了規(guī)律性的變化，按照其發(fā)生特點(diǎn)及概率可劃分為五種類型，即均勻分布、空洞式分布、周邊式分布、雙層分布、環(huán)狀分布（其中羔羊卵母細(xì)胞并未發(fā)現(xiàn)明顯的雙層分布方式）;皮質(zhì)顆粒的遷移方式為由卵母細(xì)胞胞質(zhì)中央的皮質(zhì)顆粒先向卵母細(xì)胞近皮質(zhì)處遷移，近皮質(zhì)處的皮質(zhì)顆粒再逐漸向細(xì)胞膜下遷移形成雙

4、層分布，最后近皮質(zhì)處的皮質(zhì)顆粒遷移完畢，在細(xì)胞膜下形成一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
　　測(cè)定成年綿羊和羔羊卵母細(xì)胞體外成熟0h、8h、12h、16h、24 h的核相及皮質(zhì)顆粒分布情況，結(jié)果顯示:(1)無(wú)論是成年綿羊還是羔羊，其卵母細(xì)胞在體外成熟的5個(gè)時(shí)間點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的特征性核相分別是GⅤ期、GⅤBD期、MⅠ期、AⅠ～TⅠ期、MⅡ期核相，其百分比均超過(guò)50％以上，其中成年綿羊卵母細(xì)胞在ⅣM24 h的MⅡ期比例為73.2％，羔羊?yàn)?9.4％，兩者差異顯

5、著(P＜0.05);(2)隨著卵母細(xì)胞體外成熟時(shí)間的延長(zhǎng)，成年綿羊卵母細(xì)胞的前三種皮質(zhì)顆粒分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升。羔羊卵母細(xì)胞的前兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升，但羔羊卵母細(xì)胞在ⅣM12 h、16 h、24 h時(shí)，皮質(zhì)顆粒的均勻分布比例之間差異不顯著(P＞0.05)。另外，成年綿羊卵母細(xì)胞在ⅣM24 h時(shí)，皮質(zhì)顆粒呈環(huán)狀分布的比例達(dá)到了47％，而羔羊卵母細(xì)胞只達(dá)到了25.

6、7％，兩者之間差異顯著(P＜0.05);(3)隨著卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟進(jìn)程的發(fā)展，成年綿羊卵母細(xì)胞的前三種皮質(zhì)顆粒分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升。羔羊卵母細(xì)胞的前兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升，但羔羊卵母細(xì)胞中皮質(zhì)顆粒呈均勻分布的比例在各減數(shù)分裂階段均較高，即由GⅤ期～MⅠ期，羔羊卵母細(xì)胞中皮質(zhì)顆粒呈均勻分布的比例均顯著高于同時(shí)期其他皮質(zhì)顆粒分布類型比例(P＜0.05)。另外，無(wú)

7、論是成年綿羊還是羔羊，皮質(zhì)顆粒呈環(huán)狀分布的卵母細(xì)胞比例均在MⅡ期時(shí)達(dá)到最高，其比例分別為56.8％和44％，顯著高于同時(shí)期其它類型比例(P＜0.05)，且顯著高于其它時(shí)期皮質(zhì)顆粒呈環(huán)狀分布的卵母細(xì)胞比例(P＜0.05)，兩比例之間差異顯著(P＜0.05)。可見(jiàn)，在體外成熟過(guò)程中，大部分綿羊卵母細(xì)胞隨著細(xì)胞核的成熟，其皮質(zhì)顆粒的遷移程度逐漸增大，有些卵母細(xì)胞的皮質(zhì)顆粒遷移速度相對(duì)滯后或在不同的減數(shù)分裂階段中發(fā)生停滯。相比較羔羊卵母細(xì)胞，成