牛卵母細(xì)胞體外成熟過程中核遷移及體外發(fā)育的研究.pdf

1、本試驗(yàn)研究采用地衣紅染色方法，對(duì)直徑為2-8mm牛卵泡卵母細(xì)胞體外成熟過程中核遷移過程進(jìn)行了詳細(xì)地研究；并通過體外受精，探討了不同的培養(yǎng)體系對(duì)牛受精胚體外發(fā)育的影響，為進(jìn)一步研究牛卵母細(xì)胞減數(shù)分裂機(jī)制和調(diào)控以及改善牛早期胚胎培養(yǎng)體系提供科學(xué)依據(jù)。 研究結(jié)果如下： 1、探討了卵巢性周期、卵丘細(xì)胞、成熟培養(yǎng)時(shí)間以及牛卵泡液(bFF)對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果表明：均得可用卵子數(shù)卵泡期卵巢(7.00)極顯著高于黃體期卵巢

2、(3.12)(P<0.01)，卵泡期卵母細(xì)胞核成熟率(80.35％)顯著高于黃體期卵母細(xì)胞(71.70％)(P<0.05)；卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)的質(zhì)量影響卵母細(xì)胞的體外成熟，A、B級(jí)卵母細(xì)胞成熟率分別是88.15％(186/211)和68.54％(122/178)，兩者差異顯著(P<0.05)；將隨機(jī)分成三組的卵母細(xì)胞分別培養(yǎng)18h(Ⅰ組)、22h(Ⅱ組)和24h(Ⅲ組)，Ⅰ組成熟率(69.81％)顯著低于Ⅱ組(79.41％

3、)和Ⅲ組(82.93％)(P<0.05)；成熟培養(yǎng)液中添加10％的bFF對(duì)牛卵母細(xì)胞體外核成熟幾乎沒有影響，但高濃度的bFF(20％、30％)則抑制牛卵母細(xì)胞的體外成熟。本試驗(yàn)采用TCM-199成熟培養(yǎng)體系：(TCM-199+3mg/mlBSA+2.5mg/mlTaurine+10ug/mlFSH+100IU/mlGentamycin+5％FBS)能夠有效支持卵母細(xì)胞體外核成熟，是牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)理想的培養(yǎng)體系。 2、采用

4、傳統(tǒng)的醋酸地衣紅染色法，詳細(xì)研究了直徑2-8mm卵泡卵母細(xì)胞體外成熟過程中細(xì)胞核遷移進(jìn)程，結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛卵母細(xì)胞的成熟分裂從GVBD開始，其細(xì)胞核逐漸由卵母細(xì)胞近中央位置向卵母細(xì)胞皮質(zhì)區(qū)遷移，之后同源染色體分開，排出第一極體。卵母細(xì)胞成熟后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，M II期細(xì)胞核又逐漸遠(yuǎn)離第一極體端。應(yīng)用面積積分法處理，得到核成熟進(jìn)程為：0-5.8h為GV期，持續(xù)5.8h；5.8-7.4h為GVBD期，持續(xù)1.6h；7.4-9.8h為DK期，

5、持續(xù)2.4h；9.8-15.1h為M Ⅰ期，持續(xù)5.3h；15.1-18.0h為A Ⅰ/T Ⅰ期，持續(xù)2.9h；18.0-24.0h為MII期，持續(xù)6h。 3、對(duì)比了TCM-199、CRlaa、SOF和mSOF分步培養(yǎng)四種培養(yǎng)體系的培養(yǎng)效果，并探討了血清對(duì)其早期胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果表明：2-細(xì)胞胚率和8-細(xì)胞胚率4種培養(yǎng)體系之間差異不顯著，mSOF分步培養(yǎng)體系的桑椹胚/囊胚的比率為27.3％，顯著高于TCM-199培養(yǎng)體系(17