hsa-mir-98-5p在齊順保利爾治療ITP中的差異表達(dá)研究.pdf

1、目的:檢測(cè)hsa-miR-98-5p在ITP患者經(jīng)蒙藥齊順保利爾治療前后的差異性表達(dá)，并進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)和基因功能描述，探索hsa-miR-98-5p在蒙藥齊順保利爾有效治療ITP的過程中所起的作用。
　　方法:首先，采用病例回顧性分析的方法，收集2013年5月到2014年5月期間就診于內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院血液科的單獨(dú)采用蒙藥治療的32例ITP患者病例并分析相關(guān)的臨床資料，資料分析證明了蒙藥齊順保利爾治療ITP有效。然后，對(duì)201

2、4年6月～2015年6月期間在我院血液科被確診為ITP并排除其他自身免疫性疾病或其他慢性疾病病史的43例ITP患者和同期收集38例健康志愿者并采集血樣。從43例經(jīng)初治被診斷為特發(fā)性血小板減少性紫癜患者當(dāng)中隨機(jī)抽出4名，并從38例健康者當(dāng)中隨機(jī)選出4名作為對(duì)照組。每一名入組者被采集靜脈血5ml并用EDTA抗凝管存儲(chǔ)。采用Ficoll-Paque(Sigma，St.Louis，MO)分離外周血樣中單個(gè)核細(xì)胞，利用TRIzol等相關(guān)試劑提取各

3、個(gè)樣本總RNA，其完整性通過凝膠電泳來評(píng)估，總RNA的質(zhì)量采用NanoDrop2000分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。采用Illumina提供的Truseq小RNA樣本制備試劑盒，制備編碼小RNA包括mi RNAs在內(nèi)的cDNA庫并用Illumina Hiseq2000對(duì)cDNA進(jìn)行測(cè)序和過濾，并用BGI公司提供的SOAP軟件繪制出與ITP相關(guān)的基因組，采用Mirdeep從無名的序列中篩選出新的miRNAs，通過三組測(cè)序結(jié)果的相互比較找出差異性表達(dá)

4、的microRNAs，包括hsa-miR-98-5p。最后通過擴(kuò)大樣本量，利用RT-PCR技術(shù)對(duì)顯著差異表達(dá)的hsa-miR-98-5p在其余的39例ITP和34例健康者中進(jìn)行相關(guān)結(jié)果驗(yàn)證。
　　利用Illumina HiSeqTM2000對(duì)hsa-miR-98-5p進(jìn)行注釋，并將差異性表達(dá)的hsa-miR-98-5p進(jìn)行靶基因的預(yù)測(cè)以及GO分析。
　　結(jié)果:1.ITP治療前組與正常組相比，共有6個(gè)miRNAs在外周血單個(gè)核

5、細(xì)胞中差異表達(dá)。ITP治療前組中有2個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào)，4個(gè)表達(dá)下調(diào)，但是沒有發(fā)現(xiàn)hsa-miR-98-5p;
　　2.蒙藥齊順保利爾治療后的ITP組與正常組相比，共有19個(gè)miRNAs在外周血單個(gè)核細(xì)胞中差異表達(dá)。蒙藥齊順保利爾治療后的ITP組中有6個(gè)表達(dá)下調(diào)，13個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào)，其中就包括hsa-miR-98-5p;
　　3.蒙藥齊順保利爾治療后的ITP組與治療前組相比，共有44個(gè)miRNAs在外周血單個(gè)核細(xì)

6、胞中差異表達(dá)。其中，在ITP治療后組中有9個(gè)表達(dá)下調(diào)，35個(gè)表達(dá)上調(diào)，其中治療后表達(dá)上調(diào)的hsa-miR-98-5p是正常對(duì)照的6.593倍;
　　4.靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)hsa-miR-98-5p作用的靶基因包BCL2L1,CASP3,TNFSF10,CD86,IL6,ITGB3,FAS,FASLG,II10,IL18R1。
　　結(jié)論:1.齊順保利爾治療ITP臨床癥狀減輕，血小板數(shù)量明顯增加，沒有產(chǎn)生明顯副作用，治療效果顯著。<