mir-885-5p在腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分、miR-885-5p在原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移中作用機(jī)制的研究
　　背景:目前，肝癌是世界第六大腫瘤，在我國(guó)致死率位居第三。由于肝癌患者早期癥狀不是很明顯，很多肝癌患者發(fā)現(xiàn)一般為晚期。肝癌對(duì)化療表現(xiàn)為較強(qiáng)的耐受性。所以探索有效的生物標(biāo)志物和生物治療靶點(diǎn)對(duì)臨床治療肝癌具有重要意義。
　　miR-885-5p是由miR-885的5'端剪切而成，其基因座位于3p25.3。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，在肝硬化病人的血清中miR-885-5p

2、的水平高于原發(fā)性肝癌病人和正常人。隨后也有研究發(fā)現(xiàn)miR-885-5p可以抑制惡性膠質(zhì)瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)移。而miR-885-5p在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用還未見(jiàn)報(bào)道。所以，本文以miR-885-5p為研究對(duì)象，通過(guò)各種實(shí)驗(yàn)手段，闡明了miR-885-5p在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用以及下游分子機(jī)制，為肝癌的臨床治療提供有力的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.我們運(yùn)用原位雜交技術(shù)（In situ hybridization）和實(shí)時(shí)熒光定量PC

3、R(Real-time qPCR)的方法檢測(cè)miR-885-5p在不同分期的肝癌組織和不同惡性程度的肝癌細(xì)胞系中的表達(dá);
　　2.我們運(yùn)用原位雜交技術(shù)檢測(cè)來(lái)自55位病人的肝癌組織中的miR-885-5p的表達(dá)并作生存率分析;
　　3.我們?cè)诘捅磉_(dá)miR-885-5p的肝癌細(xì)胞系HCCLM3和SK-Hep-1中過(guò)表達(dá)miR-885-5p，運(yùn)用Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-885-5p對(duì)細(xì)胞系遷移和浸潤(rùn)的影響;在高表達(dá)

4、miR-885-5p的HepG2細(xì)胞系中沉默miR-885-5p，觀察其對(duì)肝癌生長(zhǎng)的影響;
　　4.我們建立過(guò)表達(dá)miR-885-5p的肝癌原位成瘤模型，觀察miR-885-5p體內(nèi)對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移和對(duì)小鼠生存期的影響;并且建立SK-Hep-1細(xì)胞的皮下成瘤模型，瘤內(nèi)注射miR-885-5p的類似物，觀察對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響;
　　5.我們使用生物信息學(xué)的方法預(yù)測(cè)miR-885-5p的靶基因，然后利用雙熒光報(bào)告分析進(jìn)行驗(yàn)證;用West

5、ern Blot的方法檢測(cè)靶基因?qū)ο掠涡盘?hào)通路蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.miR-885-5p在分期為T2N0M0的肝癌組織中的表達(dá)高于T3N0M0，在肝癌細(xì)胞系中，miR-885-5p在轉(zhuǎn)移能力高的細(xì)胞系中低表達(dá)，在沒(méi)有轉(zhuǎn)移能力的細(xì)胞系中高表達(dá);
　　2.miR-885-5p的表達(dá)與肝癌病人的預(yù)后呈正相關(guān);
　　3.過(guò)表達(dá)miR-885-5p可以在體外抑制肝癌細(xì)胞系HCCLM3和SK-Hep-1的遷移

6、和浸潤(rùn);沉默miR-885-5p后可以促進(jìn)HepG2細(xì)胞的增殖;
　　4.過(guò)表達(dá)miR-885-5p可以在體內(nèi)抑制肝癌的轉(zhuǎn)移，并與小鼠的生存期呈正相關(guān)，瘤內(nèi)注射miR-885-5p的類似物發(fā)現(xiàn)可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)并且促進(jìn)其壞死;
　　5.miR-885-5p直接結(jié)合β-catenin和TCF4的3'UTR區(qū)，抑制其表達(dá);進(jìn)一步抑制了Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性以及下游蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.m

7、iR-885-5p的表達(dá)與肝癌的臨床分期呈負(fù)相關(guān)，與肝癌病人的預(yù)后呈正相關(guān);
　　2.miR-885-5p過(guò)表達(dá)可以在體內(nèi)和體外抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移，沉默miR-885-5p后可以促進(jìn)肝癌的生長(zhǎng);
　　3.miR-885-5p通過(guò)抑制β-catenin和TCF4的表達(dá)抑制了Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性。
　　第二部分、miR-885-5p在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤增殖中作用機(jī)制的研究
　　背景:彌漫性大B細(xì)胞淋

8、巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金式淋巴瘤的一種，治療困難復(fù)發(fā)率高。新的治療靶點(diǎn)的探索具有重要的臨床意義。表達(dá)異常的miRNA在調(diào)控彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)展中起到重要的作用，目前關(guān)于miR-885-5p如何參與DLBCL的發(fā)展研究還很少。
　　方法:
　　1.本文用Real time qPCR的方法檢測(cè)了正常淋巴母細(xì)胞和多種DLBCL細(xì)胞中的miR-885-5p表達(dá)情況;

9、
　　2.我們?cè)贠CI-LY3細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-885-5p，用CCK-8試劑盒檢測(cè)miR-885-5p對(duì)細(xì)胞增殖的作用;
　　3.我們?cè)赩AL細(xì)胞中沉默miR-885-5p，用CCK-8試劑盒檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖的作用;
　　4.我們使用生物信息學(xué)的方法預(yù)測(cè)miR-885-5p的靶基因，然后利用雙熒報(bào)告分析進(jìn)行驗(yàn)證;用Western Blot的方法檢測(cè)對(duì)下游信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響;
　　5.我們?cè)贠CI-LY3和O

10、CI-LY19細(xì)胞中沉默細(xì)胞溶質(zhì)蛋白1(lymphocytecytosolic protein1，L-plastin)觀察對(duì)細(xì)胞的增殖的作用。
　　結(jié)果:
　　1.miR-885-5p在DLBCL細(xì)胞系中的表達(dá)低于正常淋巴母細(xì)胞;
　　2.過(guò)表達(dá)miR-885-5p可以抑制OCI-LY3細(xì)胞的增殖;
　　3.沉默miR-885-5p可以促進(jìn)VAL細(xì)胞的增殖；
　　4.miR-885-5p可以直接結(jié)合到L-p