不同程度低血糖應(yīng)激時(shí)大鼠下丘腦TRH及GLP-1受體表達(dá)的變化.pdf

1、目的:
　　應(yīng)激時(shí)，機(jī)體會(huì)為生存做出必須的生物調(diào)整來維持體內(nèi)平衡，包括刺激腦中通路引起HPA軸和SNS軸的激活，從而導(dǎo)致一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)。HPA軸和HPT軸在維持能量平衡時(shí)發(fā)揮重要作用。急性低血糖應(yīng)激時(shí)，下丘腦的“糖感受器”將信息迅速傳遞到相關(guān)神經(jīng)元，引起下丘腦CRH細(xì)胞興奮，CRH神經(jīng)元的分泌活動(dòng)直接接受GLP-1的調(diào)控，而TRH和GLP-1R同時(shí)在下丘腦表達(dá)。因此，本研究主要是想了解不同程度低血糖時(shí)大鼠下丘腦組織TRH及G

2、LP-1R的表達(dá)的變化，探討在機(jī)體在急性低血糖應(yīng)激時(shí)HPT軸改變及GLP-1R對(duì)應(yīng)激的調(diào)控。
　　方法:
　　選取3-8周齡SPF級(jí)Wistar雄性大鼠21只，體重200-220g（購自于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。采用胰島素腹腔注射誘導(dǎo)大鼠低血糖的方法，腹腔注射短效胰島素(生物合成人胰島素，諾和諾德公司，50U/kg)。以微型血糖儀（德國羅康全）斷尾法測量血糖，并記錄所有大鼠腹腔注射胰島素后每隔30分鐘的血糖值，直至達(dá)到目

3、標(biāo)血糖。根據(jù)血糖分為3組，每組7只，正常血糖組（對(duì)照組）;輕度低血糖組（血糖2.0～2.8mmol/L表現(xiàn)出興奮，身體發(fā)抖，四處覓食）;重度低血糖組（血糖＜2.0mmol/L，神志恍惚，甚至全身抽搐）。所有大鼠稱體重，10％水合氯醛腹腔麻醉后，上腹正中切口，游離肋骨，心臟采血，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘，分離血漿，存入Eppendorf管中，-80℃冰箱中保存，待測血中FT3、FT4、TSH濃度;待雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELIS

4、A)檢測血GLP-1蛋白濃度。大鼠經(jīng)心臟采血后，斷頭，3分鐘內(nèi)取腦，分離腦組織后迅速置于-40℃C干冰異戊烷中，30秒快速冷凍腦組織后于-80℃冰箱凍存，待Western Blot檢測TRH和GLP-1R蛋白表達(dá);實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測TRHmRNA和GLP-1R mRNA表達(dá)水平。
　　數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理、分析，所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(（X）±SE)表示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)多獨(dú)立樣本檢驗(yàn)用Cruskal Wa

5、llis分析，兩獨(dú)立樣本用Independent Samples Test分析。精確法計(jì)算P值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、低血糖時(shí)FT3在各組中無明顯變化（P＞0.05），F(xiàn)T4、TSH下降（P＜0.05），但輕度低血糖組與重度低血糖組相比無明顯差異（P＞0.05）;
　　2、大鼠下丘腦TRH蛋白表達(dá)，在低血糖時(shí)減少，其中輕度低血糖組更低于重度低血糖組（P＜0.05）;
　　3、大鼠下

6、丘腦TRH mRNA在低血糖時(shí)先下降，再升高，即重度低血糖組高于輕度低血糖組，并高于血糖正常組（P＜0.05）。
　　4、低血糖時(shí)血GLP-1在低血糖時(shí)減少，其中輕度低血糖組更低于重度低血糖組(P＜0.05);
　　5、大鼠下丘腦GLP-1R蛋白表達(dá)在低血糖時(shí)增多（P＜0.05），但輕度低血糖組與重度低血糖組比較無明顯差異（P＞0.05）;
　　6、大鼠下丘腦GLP-1RmRNA在低血糖時(shí)先下降，再升高，即重度低血糖組

7、高于輕度低血糖組，并高于血糖正常組（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、急性低血糖應(yīng)激時(shí)HPT軸被抑制，血FT3無明顯變化，F(xiàn)T4、TSH分泌減少，下丘腦組織TRH蛋白表達(dá)降，下丘腦組織TRH mRNA表達(dá)先降后升;
　　2、急性低血糖應(yīng)激時(shí)血GLP-1減少，下丘腦GLP-1R mRNA表達(dá)先下降，再升高，與應(yīng)激中止后1-2小時(shí)生理不應(yīng)期相一致，阻止了HPA軸過度激活和潛在的有害后果，是限制應(yīng)激導(dǎo)致的HPA軸過度活躍