腎移植受者BK病毒的檢測及感染危險因素分析.pdf

1、目的：本研究目的在于通過對臨床患者尿脫落細胞檢查、血樣及尿樣標(biāo)本Real-time PCR檢測，探討并掌握BKV的檢測方法，初步了解腎移植術(shù)后患者BKV感染的情況，患者特征，篩選導(dǎo)致其感染復(fù)發(fā)可能的危險因素，對其移植腎的長期存活率做出預(yù)測。
　　 方法：
　　 1，實時熒光定量PCR外參照系和標(biāo)準曲線的合成：查閱文獻并設(shè)計反應(yīng)引物，確定反應(yīng)體系，化學(xué)合成BK病毒陽性模板，通過PCR擴增鑒定，DNA片段的提取和純化，重組連

2、接P載體、轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞中，進行菌群的陽性克隆鑒定，提取重組質(zhì)粒并進行梯度稀釋，RT-PCR反應(yīng)繪制標(biāo)準曲線；
　　 2、選擇2005年1月-2009年2月腎移植術(shù)受者113例作為受試對象，留取外周血和尿液標(biāo)本，行尿脫落細胞檢查并分別提取血樣DNA和尿樣DNA，進行RT-PCR反應(yīng)，按照PCR檢測結(jié)果將試驗對象分為BKV血尿雙陰性組、尿液單陽性組、血尿雙陽性組，明確試驗對象的BKV感染情況，將試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)

3、分析。
　　 結(jié)果：經(jīng)過RT-PCR反應(yīng)和標(biāo)準曲線的繪制，證實所合成引物、探針、目的片段之間可正?；パa結(jié)合。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后濃度梯度稀釋可得到圖像較好的標(biāo)準曲線。PCR反應(yīng)檢測BKV靈敏度下限為2.14×102copis/ul模板濃度，引物和探針具有BKV特異性。113例腎移植術(shù)后患者經(jīng)尿脫落細胞學(xué)檢查、血樣DNA和尿樣DNA RT-PCR檢測，Decoy細胞檢出率為23.9％，尿液BKV RT-PCR陽性率約為22.12％；血

4、液RT-PCR反應(yīng)陽性率為5.30％，。比較血尿雙陰性組、尿液單陽性組、血尿雙陽性組三個組別之間的臨床資料，得出血尿雙陰性組同其他兩組相比在移植術(shù)前血液透析時間方面較短，術(shù)后肺部感染發(fā)生率較低，均存在顯著性差異；而三組在患者年齡、性別、冷缺血時間、尸體供腎/活體供腎、DGF、是否應(yīng)用免疫誘導(dǎo)治療、免疫抑制劑維持治療方案、急性排斥反應(yīng)方面無顯著性差異。計算不同組別的30dCRR值，按照≤67％或>67％歸類并進行等級資料秩和檢驗，三個組兩

5、兩比較P值均大于0.05，組間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論：通過實驗我們確立并掌握了BKV病毒的檢測方法，并對臨床部分腎移植術(shù)后患者進行了檢測。從檢測結(jié)果來看，尿液脫落細胞檢查可作為臨床BKV感染初步篩選方法，陰性預(yù)測率較高，但陽性預(yù)測率低，容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，不可作為BKV感染的診斷手段。尿液樣本和血液樣本RT-PCR反應(yīng)可作為診斷BKV感染的高靈敏度和特異性的手段，還可顯示患者的病毒感染復(fù)制程度。移植術(shù)后患者的一般情況、冷缺