老年大鼠脊髓腰骶段ANB表達(dá)及相關(guān)特性.pdf

1、脊髓腰骶段對(duì)調(diào)控機(jī)體盆底肌、大腸和生殖器官等起著重要作用。在機(jī)體衰老的過程中，脊髓腰骶段呈現(xiàn)出與年齡相關(guān)的衰老性變化，同時(shí)還會(huì)表現(xiàn)出腸、膀胱和生殖器官等盆腔臟器的器質(zhì)性與功能性改變。一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一種在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的神經(jīng)信息物質(zhì)。研究顯示盆腔臟器的功能異?？赡芘c老年脊髓腰骶段的NO表達(dá)變化有關(guān)。有研究報(bào)道在衰老的過程中脊髓腰骶段出現(xiàn)年齡相關(guān)的還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黃遞酶

2、陽性體(Age-relatednicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase positive bodies，ANB)的表達(dá)。
　　隨著機(jī)體的衰老，老年男性經(jīng)常出現(xiàn)排尿功能的障礙，這可能與排尿器官或參與排尿反射的神經(jīng)調(diào)節(jié)的衰老性改變有關(guān)。參與機(jī)體排尿反射神經(jīng)調(diào)節(jié)的低位中樞位于脊髓的腰骶段，脊髓腰骶段出現(xiàn)的ANB可能影響了機(jī)體的排尿反射的神經(jīng)調(diào)節(jié)功能。在衰老的過程中，體內(nèi)

3、雄激素-睪酮(Testosterone，T)逐漸減少，ANB的表達(dá)變化是否與體內(nèi)T的減少有關(guān)目前尚不清楚。脊髓腰骶段5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)能和多巴胺(Dopamine，DA)能的信息傳遞在控制排尿的反射中起著重要的作用，除NO特性之外，ANB是否還具有其它神經(jīng)化學(xué)成分，如5-HT\DA值得進(jìn)一步研究。
　　目的：觀察老年大鼠脊髓腰骶段ANB的表達(dá)以及丙酸睪酮(Testosterone pro

4、pionate，TP)對(duì)其表達(dá)的影響，探討ANB是否與5-TH、TH共存。
　　方法：選取健康雄性Wistar大鼠，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成6月齡組(6Mon)、21月齡(21Mon)組和24月齡(24Mon)組。
　　將21Mon組和24Mon組分別采取皮下和滴鼻兩種給藥方式，即21月齡皮下給藥(21Mon-sc.TP)、21月齡滴鼻給藥(21Mon-int.TP)、24月齡皮下給藥(24Mon-sc.TP)和24月齡滴鼻給藥(24

5、Mon-int.TP)組。分別設(shè)定各自給藥方式的對(duì)照(21Mon-sc.con、21Mon-int.con、24Mon-sc.con、24Mon-int.con)組。每組各5只。皮下給藥組通過背部皮下注射睪酮制劑-TP；滴鼻給藥組通過鼻腔給予TP。給藥劑量為2.0 mg/kg.d，于5:00～6:00PM期間給藥，每天1次。對(duì)照組分別按上述方式給予芝麻油作為安慰劑。連續(xù)給藥3個(gè)月(即21Mon組從18個(gè)月開始給藥，24Mon組從21個(gè)月

6、開始給藥)。
　　大鼠以4％多聚甲醛經(jīng)心灌注固定，取脊髓腰骶段30％蔗糖保護(hù)后，行冰凍切片。相應(yīng)切片以NADPH-d組織化學(xué)染色法顯示ANB的表達(dá)、以NADPH-d組織化學(xué)復(fù)合5-HT或TH免疫組織化學(xué)雙標(biāo)記法觀察ANB與5-HT、TH是否共存。
　　結(jié)果：
　　1.NADPH-d組織化學(xué)染色的結(jié)果：
　　(1)切片的一般觀察：大鼠脊髓腰骶段的NOS陽性神經(jīng)元被染成藍(lán)色，細(xì)胞呈高爾基樣。NOS陽性神經(jīng)元胞體以中等

7、大小為主，深染或淡染，呈梭形、三角形或圓形；有2-4個(gè)突起，胞核呈空泡狀不著色。在21Mon組和24Mon組中，位于脊髓腰骶段的SDH、LT、ILN、DCN、CC等部位可見ANB的出現(xiàn)，呈現(xiàn)球形或不規(guī)則形，深染邊緣銳利且密度高。
　　(2)ANB的數(shù)量變化：經(jīng)觀察，在6Mon組未見ANB的出現(xiàn)；21Mon和24Mon組在SDH、LT、ILN、DCN、CC處均可見ANB，并且在24Mon組的數(shù)目多于21Mon組。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，21Mon-

8、sc.con組與21Mon-int.con組無明顯區(qū)別(P>0.05)；24Mon-sc.con組和24Mon-int.con組無明顯區(qū)別(P<0.05)。與21Mon-int.con組相比，ANB在24Mon-int.con組的SDH、LT、ILN、DCN和CC數(shù)目分別增長(zhǎng)了40％(P<0.05)、65％(P<0.05)、69％(P<0.05)、88％(P<0.05)和39％(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)丙酸睪酮對(duì)

9、ANB的影響：①皮下給予TP對(duì)ANB的影響：與21Mon-sc.con組相比，ANB在21Mon-sc.TP組的SDH、LT、ILN、DCN和CC的數(shù)目分別減少了40％(P<0.05)、34％(P<0.05)、40％(P<0.05)、60％(P<0.05)和82％(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與24Mon-sc.con組相比，在24Mon-sc.TP組的SDH、LT、ILN和DCN的數(shù)目分別減少了5％、13％、3％和6％，在CC增加了

10、8％。除后者外，所觀察部位存在ANB數(shù)目下降的趨勢(shì)。②鼻腔給予TP對(duì)ANB的影響：與21Mon-int.con組相比，ANB在21Mon-int.TP組的SDH、LT、ILN、DCN和CC的數(shù)目分別減少了20％(P<0.05)、22％(P<0.05)、32％(P<0.05)、38％(P<0.05)和44％(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與24Mon-int.con組相比，ANB在24Mon-int.TP組的ILN、DCN和CC分別減少6

11、％、10％和10％。部分核團(tuán)ANB數(shù)目有下降的趨勢(shì)，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)21Mon組皮下和鼻腔給予TP對(duì)ANB影響的區(qū)別：21Mon組大鼠滴鼻給藥和皮下給藥后都可以使ANB數(shù)目下降，兩種給藥途徑對(duì)ANB數(shù)量的影響無顯著區(qū)別。
　　2.NADPH-d組織化學(xué)復(fù)合5-HT/TH免疫組織化學(xué)：ANB未見與5-HT或TH免疫反應(yīng)產(chǎn)物的共存。
　　小結(jié)：1.脊髓腰骶段ANB的出現(xiàn)與衰老有關(guān)，隨著機(jī)體的老化ANB的數(shù)目逐漸增多。2.