HMGB1-TLR2-4信號途徑在小鼠實驗性腸炎中促進ILC3s炎癥效應的機制研究.pdf

1、背景：高遷移率族蛋白1（HMGB1）作為一種內源性的炎癥警報素，與TLR2或TLR4結合后能夠誘導免疫細胞產生及分泌促炎細胞因子，從而加重炎癥性腸?。↖BD）患者結腸組織損傷。第三群固有淋巴細胞（ILC3s）主要分布于消化道內，在維持腸道內環(huán)境穩(wěn)態(tài)及IBD的發(fā)病過程中發(fā)揮重要角色，但其具體作用機制尚不清楚。IBD中HMGB1通過作用于ILC3s參與腸炎的發(fā)生機制，迄今尚未報道。
　　目的：證實HMGB1可能作用于ILC3s參與IB

2、D的發(fā)生，并闡明其機制。
　　方法：⑴小鼠急性腸炎模型的制備：第0天，將TNBS溶液灌注于小鼠結腸誘導腸炎發(fā)生。第4天處死小鼠，同時收集組織樣本。⑵HMGB1阻斷抗體干預：誘導腸炎前一天起，每隔一天腹腔注射抗HMGB1單克隆抗體，總共三次（每次200μg/只）。對照組小鼠同樣方法給予IgG抗體干預。⑶在體外用0ng?ml,500ng?ml或1000ng/ml的rHMGB1蛋白刺激wt、TLR2-/-、TLR4-/-小鼠結腸ILC3

3、s，收集細胞培養(yǎng)上清進行ELISA檢測。⑷向TLR2-/-、TLR4-/-急性腸炎小鼠過繼轉輸 rHMGB1蛋白刺激過的wt小鼠ILC3s，觀察小鼠腸炎的變化。⑸檢測方法與指標：誘導腸炎后監(jiān)測小鼠體重、結腸長度、疾病活動指數等變化；H&E染色檢測結腸組織病理學改變；免疫組化技術檢測小鼠結腸組織中HMGB1水平；ELISA技術檢測血清、組織勻漿和細胞培養(yǎng)上清中相關細胞因子水平；流式細胞術檢測結腸組織中ILC3s及其亞群數量和功能變化。

4、r>　　結果：①小鼠的體重變化、疾病活動指數、結腸大體標本觀察，以及組織病理學結果證實TNBS誘導的小鼠急性腸炎模型建立成功。②小鼠急性腸炎模型中，結腸組織中HMGB1表達增高，結腸中ILC3s數量增多，兩者存在線性相關關系。③抗HMGB1單抗可以抑制小鼠急性腸炎的結腸炎癥，同時結腸組織中ILC3s數量減少及其相關細胞因子IL-17、IFN-γ、IL-22的產生下調。④小鼠結腸中約有50％的ILC3s表達TLR2，約有16%的ILC3s

5、表達TLR4。⑤TLR2或TLR4基因敲除后，小鼠腸道炎癥減輕，結腸組織中HMGB1表達降低、ILC3s數量減少且相關細胞因子IL-17、IFN-γ、IL-22水平降低。⑥體外實驗結果證實，rHMGB1蛋白可通過TLR2或TLR4直接作用于ILC3s，并刺激后者分泌細胞因子IL-22、IL-17和IFN-γ。⑦過繼輸入rHMGB1蛋白預刺激的ILC3s在一定程度上可以恢復TLR2-/-、TLR4-/-小鼠ILC3s在腸炎發(fā)病過程中的促炎