HMGB1-TLR4信號傳導(dǎo)途徑對神經(jīng)病理性疼痛的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、研究背景:神經(jīng)病理性疼痛(Neuropathic pain)是臨床上常見且難以治療的慢性疾病,國際疼痛研究協(xié)會將其定義為由于創(chuàng)傷或疾病累及體感系統(tǒng)后直接導(dǎo)致的疼痛。近來的研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的增殖活化參與調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛過程。Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)是一種與免疫性或炎癥性疾病關(guān)系密切的模式識別受體,激活后可通過NF-κB信號途徑生成并釋放大量的促炎細(xì)胞因子。在中樞神經(jīng)系統(tǒng),TLR4主要表達(dá)

2、與小膠質(zhì)細(xì)胞,并在小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和中樞免疫炎癥過程中起著重要的作用。高遷移率族蛋白1(Highmobility group box-1 protein,HMGB1)為TLR4內(nèi)源性配體,在神經(jīng)病理性疼痛大鼠或骨癌痛大鼠的脊髓背角中都有較高的表達(dá)。上述研究提示脊髓水平HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路參與調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖活化和神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生及發(fā)展過程。
　　研究目的:探討HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路在調(diào)

3、節(jié)脊髓背角中小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和神經(jīng)病理性疼痛中的作用。
　　方法:選擇成功鞘內(nèi)置管后無運(yùn)動障礙的雄性SD大鼠,體質(zhì)量250g～300 g,隨機(jī)分為正常組(N組)、假手術(shù)組(Sham組)、慢性坐骨神經(jīng)壓榨性損傷組(CCI組)、EGCG組(EGCG組)和溶劑對照組(NS組)。EGCG組,CCI組和NS組大鼠給予坐骨神經(jīng)結(jié)扎,Sham組大鼠予以假手術(shù)過程但不結(jié)扎坐骨神經(jīng),而N組則不作任何處理。EGCG組于造模前1d至造模后第3 d,每天

4、鞘內(nèi)給予表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallo catechin gallate,EGCG)10μl(1mg/kg),繼之與生理鹽水10μl沖管,其他組則與等量的生理鹽水。分別于造模前、后第1 d,4 d,7 d,10 d,14 d測量各組大鼠雙側(cè)后足底機(jī)械縮足閾值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和熱輻射刺激潛伏期(Paw withdrawal thermal latency,PW

5、TL)。于造模后第1d,4 d,7 d獲取各組大鼠的脊髓腰膨大段,采用RT-PCR,Western blot和免疫組化技術(shù)檢測HMGB1,TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白的表達(dá)變化;熒光抗體技術(shù)檢測OX-42陽性細(xì)胞;ELISA法檢測白介素10(Interleukin-10,IL-10),白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)在各組間的表達(dá)變

6、化。
　　結(jié)果:與Sham組相比,CCI組同側(cè)PWMT(P＜0.01)和PWTL(P＜0.01)明顯降低,脊髓腰膨大段HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路明顯激活,同側(cè)脊髓背角中的小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生明顯的增殖和活化,IL-10,IL-1β和TNF-α的表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)。而對側(cè)(P＞0.05)和Sham組(P＞0.05)則無明顯變化。鞘內(nèi)給予EGCG可以明顯改善CCI術(shù)后的PWMT和PWTL(P＜0.05)。與之相一致,

7、鞘內(nèi)注射EGCG后,脊髓腰膨大段HMGB1,TLR4和NF-κB的表達(dá),同側(cè)脊髓背角中OX-42陽性細(xì)胞的數(shù)量以及IL-1β和TNF-α的表達(dá)都明顯的減少(P＜0.05),而IL-10的表達(dá)則明顯的增加(P＜0.05)。
　　結(jié)論:脊髓水平HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路在神經(jīng)病理性疼痛的病理機(jī)制中起著重要的作用,EGCG可以明顯抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,起到治療慢性坐骨神經(jīng)壓榨性損傷