HLA-G 14bp基因多態(tài)性及血漿sHLA-G水平與兒童EV71感染關(guān)系的研究.pdf

1、目的:本研究通過(guò)檢測(cè)EV71感染手足口病(HFMD)患兒的人類(lèi)白細(xì)胞抗原G(HLA-G)14bp插入/缺失多態(tài)性、血漿可溶性HLA-G(sHLA-G)及IL-6、10水平，探討其與兒童EV71感染的相關(guān)性。
　　 方法:采集185例疑似HFMD患兒咽拭子標(biāo)本進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)EV71-RNA;采用PCR結(jié)合高分辨熔解曲線(HRM)技術(shù)，對(duì)125例EV71感染HFMD患兒及133例正常對(duì)照兒章進(jìn)行了HLA-G14bp插入

2、/缺失多態(tài)性的檢測(cè)；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)了81例EV71感染HFMD患兒及133例正常對(duì)照兒童血漿中sHLA-G水平；采用ELISA檢測(cè)了64例EV71感染HFMD患兒及24例正常對(duì)照兒章的血漿IL-6、IL-10水平。應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，分析HLA-G14bp插入/缺失基因型多態(tài)性分布頻率及血漿sHLA-G、IL-6、IL-10水平在不同組別之間的差異及其相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　

3、　 1.185例疑似手足口病患兒咽拭子標(biāo)本，實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)EV71-RNA陽(yáng)性152例，陽(yáng)性檢出率為82.16％(152/185)。
　　 2．克隆含14bp-/-純合子基因和14bp+/+純合子基因片段的質(zhì)粒DNA作為HRM技術(shù)檢測(cè)基因分型的對(duì)照，優(yōu)化反應(yīng)體系，成功建立了HRM技術(shù)檢測(cè)HLA-G14bp插入/缺失突變的方法。
　　 3．EV71感染HFMD組與正常對(duì)照組HLA-G14bp插入/缺失基因型多態(tài)

4、性分布頻率均符合遺傳學(xué)的Hardy-Weinberg平衡定律。EV71感染HFMD組HLA-G14bp插入/缺失等位基因的頻率分別為29.2％和70.8％，對(duì)照組分別為41.0％和59.0％，兩組等位基因分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=7.830，P=0.005，其中-14bp的OR值為：1.321;95％Cl：1.077-1.621;+14bp的OR值為：0.785;95％CI:0.666-0.925)。
　　 4．EV71感

5、染HFMD組HLA-G14bp插入/缺失基因型多態(tài)性14bp-/-、14bp+/-和14bp+/+的頻率分別為49.6％、42.4％和8.0％，正常對(duì)照組分別為34.6％、48.9％和16.5％，兩組基因型多態(tài)性分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.850，P=0.020)。其中14bp+/+基因型與非14bp+/+基因型（包括14bp+/-和14bp-/-）兩組間的分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.327，P=0.038)；14bp+

6、/-基因型與非14bp+/-基因型（包括14bp+/+和14bp-/-）兩組間的分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.024，P=0.876)；14bp-/-基因型與非14bp-/-基因型（包括14bp+/+和14bp+/-）兩組間的分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.968，P=0.015)。
　　 5．EV71感染HFMD組血漿sHLA-G水平(U/mI)(M=88.6，P5=9.71，P95=148.98)明顯高于正常對(duì)照組

7、(M=15.37，P5=3.67，P95=60.18)，經(jīng)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-9.104，P=0.000)。EV71感染危重型組血漿IL-6水平(pg/ml)(M=12.70)高于重型組血漿IL-6水平(M=5.21)，經(jīng)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.516，P=0.012）：EV71感染危重型組血漿IL-10水平(pg/ml)(M=147.00)高于重型組血漿IL-10水平

8、(M=31.75)，經(jīng)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.408，P=0.016)。
　　 6．EV71感染HFMD組不同HLA-G14bp插入/缺失基因型間IL-6、IL-10差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=0.361，P=0.835;H=1.124，P=0.570)。EV71感染HFMD組血漿sHLA-G水平與血漿IL-6、IL-10水平也無(wú)明顯關(guān)聯(lián)(r=0.235，P=0.333;r=0.257,P=0.28

9、9)。
　　 結(jié)論:
　　 1．本研究建立的基于HRM技術(shù)檢測(cè)HLA-G14bp插入/缺失基因突變的方法具有簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)。
　　 2．HLA-G14bp插入/缺失基因型多態(tài)性與兒章EV71感染HFMD的發(fā)生有關(guān)聯(lián)，攜帶14bp-/-基因型或缺失14bp等位基因的兒章可能更易發(fā)生EV71感染HFMD。
　　 3．EV71感染HFMD組的血漿sHLA-G水平明顯高于正常對(duì)照組，提示sHLA-G參與了EV7

10、1感染HFMD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，血漿sHLA-G水平可作為EV71感染HFMD的輔助診斷指標(biāo)。EV71感染危量型組血漿IL-6、IL-10水平高于EV71感染重型組，提示IL-6、IL-10對(duì)評(píng)估疾病的嚴(yán)重性有一定的參考價(jià)值。
　　 4．HLA-G14bp插入/缺失基因型多態(tài)性及血漿sHLA-G水平與EV71感染HFMD患兒的IL-6、IL-10沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián)，提示可能存在其它的機(jī)制或因素影響EV71感染HFMD患兒的免疫反應(yīng)狀態(tài)，