飼用復(fù)合酶高產(chǎn)菌株的選育及其酶學(xué)特性的研究.pdf

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文飼用復(fù)合酶高產(chǎn)菌株的選育及其酶學(xué)特性的研究姓名：王水順申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：謝必峰2002.4.15摘要鑒于黑曲霉a 刪池，嘲弘，) 能夠產(chǎn)生多種胞外水解酶的能力，本文以黑曲霉F J- - 0 0 8 為出發(fā)菌株。研究報(bào)道了飼用復(fù)合酶高產(chǎn)菌株的選育、發(fā)酵工藝的優(yōu)化、變株S L 2 —1 1 1 產(chǎn)酸性蛋白酶的提取、純化與酶學(xué)特性等方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。／／一、 飼用復(fù)合酶高產(chǎn)菌株選育的研

2、究／吣對(duì)出發(fā)菌株黑曲霉F J —0 0 8 進(jìn)行紫外線、紫外線和亞硝基胍復(fù)合誘變后，獲得1 2 6 0個(gè)單菌落，從瓊脂塊鑒定板上挑選到1 3 9 株變異輻度較大的菌株。將上述1 3 9 株變異株，按鑒定板上單菌落透明豳的直徑大小排列，把變異株透明圈直徑大予對(duì)照株透明圈直徑2 0 ％的取值為1 ，小于2 0 ％的取值為．1 ，其余取為0 。從這三個(gè)區(qū)域中隨機(jī)取樣，共挑取1 6 株變株。把這1 6 株變株和對(duì)照株進(jìn)行三角瓶固體發(fā)酵。測(cè)定酸性

3、蛋白酶、果膠酶、纖維素酶三種酶的發(fā)酵酶活，重復(fù)試驗(yàn)三次。結(jié)果取平均值。獲得一株復(fù)合酶高產(chǎn)菌株S L 2 —1 1 1 。- 變株s L 2 一1 1 l 形態(tài)與出發(fā)株F J —0 0 8 有所區(qū)別：s L 2 —1 11 在查氏培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)較緩慢。3 0h 才出現(xiàn)針尖大的菌落，而原始菌株F 卜_ 0 0 8 在2 0h 就出現(xiàn)了針尖大的菌落，但變株s L 2 ～1 1 l 形成孢子的時(shí)間較早，菌落周圍放射狀鉤紋較少，菌落背面色素較淺

4、，皺褶較少．變株s L 2 一1 1 1 在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基上’變溫培養(yǎng)7 2 h 。每克鮮曲酸性蛋白酶發(fā)酵酶活可達(dá)4 5 2 5 U ／g 、果膠酶7 0 1 5 U l g 、纖維素酶4 4 9 7 U ／g ，分別比出發(fā)菌株F 卜- 0 0 8 提高了9 7 ．9 0 ／0 、7 0 ．1 ％和1 3 ．4 ％。突變株s L 2 一n 1 經(jīng)斜面?zhèn)鞔囵B(yǎng)5 代，產(chǎn)酶特性穩(wěn)定。對(duì)1 6 株經(jīng)紫外線和亞硝基胍復(fù)臺(tái)誘變后突變株三角瓶固體發(fā)