高產(chǎn)脂肪酶菌株的選育研究.pdf

1、脂肪酶是一種催化甘油三酯水解的酶,它催化天然底物油脂水解,生成脂肪酸、甘油和甘油單酯或二酯。脂肪酶基本組成單位僅為氨基酸,通常只有一條多肽鏈,它的催化活性僅僅決定于它的蛋白質結構。脂肪酶是擁有多種催化反應的酶,能夠催化三酰甘油酯和其它一些不溶水酯類的酯化、醇解、水解、轉酯化及酯類的逆向合成等反應,根據(jù)反應體系的不同脂肪酶表現(xiàn)出不同的活性,如在油水界面可以促進酯水解,但在有機相中則酶促合成和酯交換反應。脂肪酶廣泛的存在于動植物和微生物中。

2、研究脂肪酶主要研究脂肪酶的最適溫度與最適pH、對溫度與pH的穩(wěn)定性以及底物特異性等方面。微生物脂肪酶能夠有更廣的pH和溫度范圍,所以工業(yè)上生產(chǎn)脂肪酶主要選擇微生物。脂肪酶是重要的工業(yè)酶制劑品種之一,主要應用于食品、醫(yī)藥、日化、以及油脂加工等方面。具有轉酯化或酯化功能的脂肪酶對酶催化合成精細化學品和手性化合物有重要意義。脂肪酶能增加和改進食品的風味和香味,生產(chǎn)各種香精酯,提高食用油營養(yǎng)價值和增加食用油的花色品種,改善面包質量,改善蛋白的發(fā)

3、泡,消旋混合物的光學拆分等。脂肪酶還有一個重要的作用是應用于生物柴油的生產(chǎn)中。生物柴油是近年來研究的類似于柴油的一種生物質可再生能源。生物柴油的主要成分是脂肪酸甲酯,在脂肪酶的催化作用下,醇類物質與天然植物油或動物油脂中的主要成分甘油三酯發(fā)生酯交換反應,利用甲氧基取代脂肪酸上的甘油基,從而形成三個長鏈的脂肪酸甲酯,改善了油料的粘度和氣化性能,達到了燃料的要求。
　　 本研究從土壤、飯店油煙機排氣孔、屠宰場下水道土壤和飯店排污池等

4、地取得約160份土樣,通過羅丹明B平板初篩和搖瓶發(fā)酵復篩選出14株產(chǎn)脂肪酶量高的菌株,其中一株的最高產(chǎn)量為6.75U/mL,以此菌株為出發(fā)菌株再進行誘變選育。通過菌株的菌落形態(tài)、單細胞形態(tài)和生理生化性質,參照《真菌鑒定手冊》,命名此菌株為白地霉Geotrichum candidum L-8。白地霉Geotrichum candidum L-8初始產(chǎn)酶量為6.75U/mL,通過紫外-光復活誘變對菌株進行誘變,使菌株產(chǎn)量提高到12.08U/

5、mL,使產(chǎn)量提高了78.96％。對白地霉Geotrichum candidum L-8培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化,經(jīng)過單因素試驗、Plackett-Burman設計和響應曲面設計法優(yōu)化之后產(chǎn)酶量達到27.96U/mL,最佳培養(yǎng)基麩皮5％,大豆油量1.4％,玉米漿粉5％,磷酸氫二鉀0.6％,氯化鉀0.1％,硝酸鈉0.4％,硫酸鎂0.3％,培養(yǎng)條件為裝液量30mL,于30℃,110rpm條件下培養(yǎng)24h。最后對白地霉Geotrichum cand