CRF R1受體阻斷劑對(duì)幼年大鼠快眼動(dòng)睡眠及腦內(nèi)ACh的影響.pdf

1、引言：睡眠分為快眼動(dòng)睡眠(rapid eye movement sleep，REMS)和非快眼動(dòng)睡眠(non REMS)。而REMS和NREMS在睡眠周期中所占的比例在新生期和成年期也有著很大的區(qū)別。新生期睡眠是以REMS在發(fā)育早期(初生期)最多，隨著發(fā)育成熟而逐漸減少為主要特征的。雖然在成年人和動(dòng)物，膽堿能神經(jīng)元被認(rèn)為是主要的REM睡眠的調(diào)節(jié)神經(jīng)元，已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)腦橋網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)及腳橋被蓋核膽堿能神經(jīng)元在REMS的觸發(fā)和維持中起著關(guān)鍵作用，

2、然而，膽堿能神經(jīng)元對(duì)于幼年期REM 睡眠的作用仍有待進(jìn)一步的研究。這是因?yàn)樾律笫竽X內(nèi)的膽堿能遞質(zhì)濃度是非常低的，隨著發(fā)育成熟而逐漸升高，這與REMS 的變化趨勢(shì)恰好相反?，F(xiàn)有研究表明，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(corticotropin-releasing factor，CRF)的腦內(nèi)含量與REMS在發(fā)育過(guò)程中的變化呈平行關(guān)系，而且在人類抑郁癥患者也發(fā)現(xiàn)有腦脊液CRF水平、血ACTH水平和皮質(zhì)醇水平的升高<'[29]>。有可靠證據(jù)提示

3、此類患者多數(shù)有REMS增多的傾向。而且給睡眠剝奪72小時(shí)的大鼠側(cè)腦室注射CRF后可顯著增加REMS反跳。CRF拮抗劑可以阻斷睡眠剝奪導(dǎo)致的REMS反跳。上述現(xiàn)象促使我們提出這樣的假設(shè)：CRF可能是促發(fā)幼年期高比例REM睡眠的重要因素之一。據(jù)此，我們提出這樣的問(wèn)題：使用CRF R1受體阻斷劑后，是否會(huì)導(dǎo)致發(fā)育期大鼠快眼動(dòng)睡眠減少? 目的：本研究擬用多導(dǎo)睡眠描記結(jié)合使用免疫熒光測(cè)量法，觀察對(duì)幼年(新生)大鼠注射CRF R1受體拮抗

4、劑NBl27914后，其睡眠/覺(jué)醒周期的變化，并檢測(cè)阻斷劑注射后動(dòng)物不同腦區(qū)組織內(nèi)乙酰膽堿(ACh)的含量，探討CRF在幼年大鼠REMS發(fā)生和維持中的作用，分析其可能機(jī)制。 方法：本實(shí)驗(yàn)分兩部分第一部分選用出生后13天的幼年大鼠，在乙醚麻醉下行腦電(electroencephalogram，EEG)和頸部肌電(electromyogram，EMG)電極安裝術(shù)。手術(shù)恢復(fù)12小時(shí)后開(kāi)始連續(xù)12小時(shí)的EEG和EMG描記，采集的EEG

5、和EMG信號(hào)經(jīng)過(guò)模/數(shù)及數(shù)/模轉(zhuǎn)換輸入計(jì)算機(jī)顯示并記錄，在記錄的第6小時(shí)分別給予腹腔注射三個(gè)劑量的NBl27914(12．5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg)、阿托品(6mg/kg)和等量生理鹽水。 第二部分出生后14天幼年大鼠，注射25mg/kg的NBl27914后1小時(shí)斷頭處死，取其額葉皮質(zhì)、頂葉皮質(zhì)、丘腦、下丘腦、腦橋、中腦。使用熒光ELISSA方法分別進(jìn)行熒光免疫分析，測(cè)定組織內(nèi)ACh的含量。 使用SP

6、SS(11．0版本)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，睡眠/覺(jué)醒記錄資料和免疫熒光定量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)誤(X±SE)表示。資料處理使用單因素方差分析(one way ANVOA)及F-檢驗(yàn)或t-test檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有顯著性。 結(jié)果：1．與基礎(chǔ)水平相比，對(duì)幼年大鼠腹腔注射NBl27914后6小時(shí)內(nèi)，REMS的變化在不同劑量組的比較結(jié)果顯示隨著NBI濃度的增加，相對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)組REMS相應(yīng)減少。與給藥前6小時(shí)相比，給藥后6小時(shí)平均

7、總REMS在NBl12．5mg/kg組減少35．57﹪，在NBl25mg/kg組減少48﹪，在NB150mg/kg組減少53﹪。給藥前后及給藥后與對(duì)照組相比，差異均有顯著性(P<0.05)。在REMS減少的同時(shí)，覺(jué)醒在NBI 50mg/kg組、NBI 25mg/kg和NBI 12．5mg/kg組有所增加，分別增加約為7．78﹪、7．98﹪(P0.05)。NREMS在NBI50mg/kg組、NBI 25mg/

8、kg和NBl12．5mg/kg組均有增加，分別為11.37﹪、10.23﹪和8.92﹪(P<0.01)。2.考慮膽堿能系統(tǒng)對(duì)睡眠覺(jué)醒周期的作用，我們使用阿托品——M<,1>受體阻斷劑，觀察其對(duì)幼鼠睡眠的影響。在幼年大鼠腹腔注射阿托品(6mg/kg)后，與對(duì)照組相比，REMS減少約49.00﹪。差異有顯著性P<0.0t)。REMS的減少主要伴隨著覺(jué)醒的增加(37﹪，p<0.01)而不是NREMS的增加(18﹪，p>0.05)。給藥前后及給