Nesprin-1在胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中的作用.pdf

1、本文對Nesprin-1在胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中的作用進(jìn)行了研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：Nesprin-1在C2C12肌原細(xì)胞系分化過程中的作用
　　 目的：探討Nesprin-1,一個新發(fā)現(xiàn)的含多個血影蛋白重復(fù)序列的細(xì)胞骨架蛋白家族成員,在肌細(xì)胞分化過程中的作用。
　　 方法：⑴將C2C12肌原細(xì)胞細(xì)胞分化成肌小管。⑵采用Westem-blotting和免疫熒光技術(shù)檢測Nesprin-1

2、蛋白表達(dá)水平和亞細(xì)胞定位在肌小管分化成熟過程中的改變。⑶利用RNA干擾技術(shù)抑制Nesprin-1蛋白的表達(dá),觀察對C2C12肌原細(xì)胞分化的影響。
　　 結(jié)果：①Western-blotting結(jié)果顯示nesprin-1各亞型在C2C12肌原細(xì)胞系分化過程中表達(dá)水平有所改變。②免疫熒光結(jié)果顯示nesprin-1各亞型在C2C12肌原細(xì)胞系分化過程中細(xì)胞中定位有明顯改變。③Nesprin-1 siRNA組與對照組相比,分化前后C2C

3、12細(xì)胞中nesprin-1蛋白表達(dá)明顯降低。④Nesprin-1 siRNA組與對照組相比,分化后肌組織分化成熟的蛋白標(biāo)志肌球蛋白(myosin)的表達(dá)量以及肌小節(jié)的數(shù)量比對照組均明顯減少(P＜0.001)。
　　 結(jié)論：nesprin-1對骨胳肌細(xì)胞分化至關(guān)重要,不同分子大小nesprin-1亞型在C2C12肌原細(xì)胞分化過程中發(fā)揮各自特殊作用,在該細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中作用不同。
　　 第二部分：Nesprin-1在小鼠胚

4、胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中的作用
　　 目的：探討nesprin-1在胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中的作用。
　　 方法：⑴采用懸滴-懸浮-貼壁三步法,5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-aza)與丹參共同誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞。⑵采用western-blotting與免疫熒光技術(shù)檢測nesprin-1蛋白表達(dá)水平和在分化成熟過程中的改變。⑶同時利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)抑制nesprin-1蛋白的

5、表達(dá)。Ⅰ組(RNA干擾目的序列AAAGCCAAGCACGCAACTA),Ⅱ組(RNA干擾目的序列GGGAACCAACAGTGAGATT),Ⅲ組(RNA干擾目的序列ACCAGGACATTGCGTACTA),Ⅳ組對照組,觀察對胚胎干細(xì)胞分化的影響。
　　 結(jié)果：①Nesprin-1各亞型在胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中的表達(dá)水平有所變化。②各干擾組分化后心肌組織分化成熟的蛋白標(biāo)志肌球蛋白(myosin)的表達(dá)量減少。③各組心肌細(xì)胞分