扶正抑瘤顆粒對消化道腫瘤圍化療期免疫調(diào)節(jié)的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、目的:在臨床應(yīng)用及計算機分子對接模擬基礎(chǔ)上推斷FYG具有免疫調(diào)節(jié)功效，首先利用動物模型確認(rèn)了FYG的免疫調(diào)節(jié)作用，繼而在細(xì)胞水平進行了部分作用機制的探討;回歸臨床評估扶正抑瘤顆粒(Fuzheng Yiliu Granules，F(xiàn)YG)影響消化道腫瘤患者圍化療期免疫調(diào)節(jié)及生活質(zhì)量的臨床療效。
　　 方法:
　　 1.建立H22小鼠肝癌細(xì)胞的皮下移植瘤模型，然后隨機分配到對照組（Vehicle，灌胃生理鹽水），5-FU組（1

2、0mg/kg），5-FU+FYG組(10mg/kg+18g/kg)和FYG組(18g/kg)，給藥5天后測量腫瘤重量和體積，檢測CD3、CD4、CD8、Treg、NK細(xì)胞的百分含量、血清中白介素2(interleukin-2，IL-2)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factorα，TNF-α)的濃度，腫瘤組織的凋亡情況及相關(guān)凋亡因子蛋白和基因的表達(dá)(Bax、Bcl-2、p53、C-myc)及5-FU靶酶胸苷酸合成酶(Th

3、ymidylate Synthase，TS)的表達(dá)水平。培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2，F(xiàn)YG生藥單獨給藥及聯(lián)合5-FU給藥后，噻唑藍(lán)(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT)檢測細(xì)胞活力。SD大鼠灌胃FYG7天(高劑量組:25.2 g/kg;中劑量組:12.6 g/kg;低劑量組:6.3 g/kg)，取含藥血清后檢測IL-2和TNF-α的濃度，含藥血清干預(yù)HepG2細(xì)胞后檢測細(xì)胞活力、

4、細(xì)胞增殖及凋亡情況。
　　 2.按標(biāo)準(zhǔn)入選胃癌、大腸癌患者患者85例，按最小化隨機分為治療組50例、對照組35例;治療組給予益氣養(yǎng)陰中藥聯(lián)合FOLFOX4化療方案，對照組給予安慰劑聯(lián)合FOLFOX化療方案。定期評估體力狀況、生存質(zhì)量、安全性。于基線期、化療后第4周、第8周、研究結(jié)束時檢測外周血T淋巴細(xì)胞及亞群(CD3、CD4、CD8、調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Regulatory T cells，Treg)及CD4/CD8），自然殺傷細(xì)胞(N

5、atural killingcells，NK)，免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及補體(C3、C4)濃度。
　　 結(jié)果:
　　 1.FYG單獨使用表現(xiàn)出一定的抗腫瘤功效和誘導(dǎo)凋亡作用（與對照組相比P＜0.05），腫瘤組織中Bax基因表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05），F(xiàn)YG+5-FU組小鼠腫瘤組織中野生型p53基因表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05）。FYG聯(lián)合5-FU給藥后顯著抑制了小鼠皮下移植瘤的生長且誘導(dǎo)腫瘤組織發(fā)生凋亡（與

6、對照組相比P＜0.01，與5-FU或FYG組相比P＜0.05），但未體現(xiàn)協(xié)同作用。FYG聯(lián)合5-FU后上調(diào)了胸腺指數(shù)（與對照組相比P＜0.05）， FYG上調(diào)了被5-FU抑制的WBC及LY細(xì)胞數(shù)量（FYG+5-FU vs5-FU，P＜0.01; FYGvsvehicle,P＜0.01）。FYG組與對照組相比顯著增加外周血中CD3（P＜0.01)，CD4（P＜0.01）及NK（P＜0.01）細(xì)胞的水平，抑制了Treg細(xì)胞的表達(dá)（P＜0.0

7、1）。FYG聯(lián)合5-FU后增加了CD3和CD4的百分含量（與對照組相比P＜0.01），增加了CD3和NK細(xì)胞的百分比（與5-FU組相比P＜0.05)，降低了Treg的百分含量（與對照組相比P＜0.01，與5-FU組相比P＜0.01)。FYG組和FYG+5-FU組與對照組相比顯著升高了血清中TNF-α的濃度（P＜0.01)上調(diào)腫瘤組織中Bax基因表達(dá)(與對照組相比P＜0.05，P＜0.01); FYG+5-FU組小鼠腫瘤組織中野生型p53

8、基因表達(dá)顯著上調(diào)（與對照組相比P＜0.05，P＜0.01)。
　　 2.FY復(fù)方中多糖含量約占其干重的63％，F(xiàn)Y單獨或聯(lián)合5-FU使用體外均未表現(xiàn)明顯的抗腫瘤功效。FYG含藥血清與對照組血清相比含有更高濃度的IL-2和TNF-α（P＜0.01，P＜0.05），劑量依賴性的抑制腫瘤細(xì)胞活力（P＜0.01），誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡（P＜0.01）、將腫瘤細(xì)胞阻滯在S期（P＜0.01），抑制腫瘤細(xì)胞增殖（P＜0.05）。
　　 3

9、.臨床共入組病例85例，3例出組，可評價療效病例82例，其中治療組48例、對照組34例;治療前二組基線資料分布均衡(P＞0.05)。治療組相較對照組治療后體力狀況改善率提高了29.8％(P=0.025);總生活質(zhì)量評分提高（P=0.040）;二組間癥狀領(lǐng)域中疲勞、納差項目評分下降有顯著差異（P＜0.05）;治療期間未見明顯益氣養(yǎng)陰中藥相關(guān)的不良反應(yīng)。治療組治療后CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM、C3、NK細(xì)胞均有明

10、顯提高（P＜0.05），CD8、C4無明顯提高(P＞0.05); Treg明顯降低(P＜0.05)。與對照組相比，CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgA、C3、NK細(xì)胞差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.FYG顯著改善小鼠肝癌模型接受化療藥物后的免疫功能狀態(tài)，促進腫瘤組織的凋
　　 2.FYG需經(jīng)體內(nèi)代謝后才具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進凋亡的作用。
　　 3.FYG改善化療