大鼠損傷脊髓SKIP表達(dá)的時(shí)空變化規(guī)律及作用.pdf

1、目的：脊髓損傷后機(jī)體病變及修復(fù)過(guò)程中常伴隨著一系列病理生理變化，這些病理生理變化與一些細(xì)胞、分子的變化息息相關(guān)。本研究通過(guò)建立動(dòng)物模型及實(shí)驗(yàn)觀察探究SKIP（Ski interacting protein,ski相關(guān)蛋白）在大鼠正常及損傷后的脊髓中表達(dá)的時(shí)空變化規(guī)律，及其SKIP在脊髓損傷及其康復(fù)過(guò)程中的作用。
　　方法：將90只成年雌性Sprague-Dawley大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成兩組，即假手術(shù)組(n=45)和打擊組(

2、n=45)，每組內(nèi)部各設(shè)五個(gè)時(shí)間點(diǎn)（1天、3天、5天、7天、14天），每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各9只大鼠。建立動(dòng)物模型時(shí)假手術(shù)組只咬開椎板，不予打擊脊髓；打擊組咬開椎板顯露脊髓，并用Allen法制作T10打擊損傷模型，打擊強(qiáng)度定為10g×25mm。術(shù)后兩組大鼠在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均各進(jìn)行一次BBB后肢功能評(píng)分，用以評(píng)估大鼠的行為功能。評(píng)分完成后每一時(shí)間點(diǎn)分別選取3只大鼠，取其脊髓組織做成冰凍切片后進(jìn)行尼氏染色，觀察損傷后脊髓神經(jīng)元的病理變化。每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各

3、另取3只大鼠的脊髓組織切片后行免疫熒光染色，以觀察正常及損傷脊髓組織中SKIP的表達(dá)情況。每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)剩余的3只大鼠提取脊髓組織蛋白后進(jìn)行Western Blot檢測(cè)以明確脊髓組織中目標(biāo)蛋白（SKIP）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、BBB評(píng)分結(jié)果顯示：打擊組各時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分均低于假手術(shù)組（n=9，P＜0.01）。2、尼氏染色結(jié)果表明：與假手術(shù)組相比，打擊后5d脊髓神經(jīng)元胞漿中尼氏小體開始崩解、凝聚、分布不規(guī)則，神經(jīng)元變性壞死，1

4、4d時(shí)尼氏小體大部分崩解、凝聚，損傷進(jìn)一步加重。3、熒光免疫組化染色顯示，SKIP主要在脊髓灰質(zhì)中表達(dá)，白質(zhì)中極少表達(dá)；損傷后SKIP表達(dá)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，5d時(shí)達(dá)到高峰，14d時(shí)明顯降低；光密度分析顯示，與假手術(shù)組比較，打擊組SKIP表達(dá)明顯增高（n=3，P＜0.05）；雙標(biāo)結(jié)果顯示，損傷后脊髓灰質(zhì)中，SKIP與神經(jīng)元特異性標(biāo)記物NeuN顯示出共表達(dá)信號(hào)，而與膠質(zhì)纖維的特異性標(biāo)記物GFAP無(wú)共表達(dá)信號(hào)。4、Western Blo