大鼠脊髓損傷后細胞自噬的表達及作用的實驗研究.pdf

1、蘇州大學博士學位論文大鼠脊髓損傷后細胞自噬的表達及作用的實驗研究姓名：潘文明申請學位級別：博士專業(yè)：骨外科指導教師：唐天駟20100501中文摘要大鼠脊髓損傷后細胞自噬的表達及作用的實驗研究和膠質(zhì)細胞中均可以發(fā)現(xiàn)自噬體，脊髓損傷后8H開始，細胞自噬相關(guān)基因Beclinl，LC3B的mRNA表達即較對照組明顯升高，并且隨著時間持續(xù)升高，在傷后3D時達到高峰，一直到傷后21D均有表達，而自噬相關(guān)蛋白Beclinl，LC3B的表達和其mRNA

2、表達同步。結(jié)論：脊髓損傷后損傷區(qū)的神經(jīng)元細胞和膠質(zhì)細胞均有自噬性細胞死亡的表達，自噬相關(guān)基因Beclinl和LC3B從損傷后8H開始即表達量升高，到3D時到達高峰，21D時仍然存在。自噬相關(guān)蛋白Beclinl和LC3B表達與基因表達同步，較對照組明顯升高。關(guān)鍵詞：脊髓損傷，細胞自噬，Bedim，LC3B第三部分自噬抑制劑3MA對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細胞自噬及凋亡的影響目的：研究自噬抑制劑3MA對大鼠脊髓損傷后自噬相關(guān)蛋白Beclinl和L

3、C3B表達的影響，同時評價3MA對大鼠脊髓損傷后細胞凋亡的影響。方法：將大鼠隨機分成三組：對照組，單純脊髓損傷組，3MA干預組，每組同樣分為傷后8H、1D、3D、7D、21D5個時間點，使用熒光定量RTPCR方法檢測各組各個時間點Beclinl和LC3B基因表達的變化，使用熒光免疫組織化學方法評價各組各時間點Beclinl和LC3B蛋白表達的變化，使用TUNEL法和脊髓組織的DNALadder比較各組脊髓損傷后細胞凋亡的程度，使用Wes

4、trenblot法檢測各組凋亡相關(guān)蛋白Bcl2和Bax的表達變化。結(jié)果：在我們觀測的的五個時間點上，3MA組較單純脊髓損傷組Beclinl和LC3B的mRNA表達有明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P005)。3MA組的Beclinl和LC3B的蛋白表達也較單純損傷組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(PO05)。脊髓損傷后可檢測到明顯的細胞凋亡，3MA組的TUNEL陽性細胞數(shù)明顯大于單純損傷組，組間差異有統(tǒng)計學意義(P005)。3MA組脊髓組織的D