屎腸球菌菌毛樣蛋白基因pilA與感染相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：屎腸球菌為一種條件致病菌，在過去的20多年內(nèi)，其感染比率迅速上升，尤其在我國，感染比率上升速度更快。由于屎腸球菌對(duì)多種常用抗生素天然耐藥，感染后的病死率高，同時(shí)不斷增多的耐萬古霉素屎腸球菌使治療更困難。屎腸球菌在醫(yī)院流行不僅與耐藥性增強(qiáng)有關(guān)，還可能與其體內(nèi)外適應(yīng)能力的增強(qiáng)或毒力因子的獲得有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)屎腸球菌類透明質(zhì)酸酶（Hyalronidase，HylEfm）基因位于一個(gè)含有多種耐藥基因的可傳遞大質(zhì)粒上，動(dòng)物模型證實(shí)，屎腸球

2、菌一旦獲得此大質(zhì)粒，其定植力及感染致死率均有所上升，說明hylEfm可能是屎腸球菌一個(gè)重要的毒力因子，但其確切的作用機(jī)制不清楚。菌毛在革蘭陽性菌中主要涉及對(duì)宿主細(xì)胞的黏附和侵襲，是一個(gè)重要的毒力因子。David S.Kim等發(fā)現(xiàn)菌毛樣結(jié)構(gòu)蛋白基因pilA和hylEfm共同位于一個(gè)大質(zhì)粒(pHylEfm)上，提示pilA和hylEfm基因可以通過質(zhì)粒傳遞，但具體作用尚未證實(shí)。
　　目的：研究中國屎腸球菌感染率持續(xù)上升與屎腸球菌菌毛樣

3、結(jié)構(gòu)蛋白基因pilA的相關(guān)性以及與hylEfm基因的聯(lián)系。
　　方法：采用紙片擴(kuò)散法對(duì)137株臨床感染株行藥敏試驗(yàn)，探討2009-2012年我院屎腸球菌耐藥趨勢。多重PCR法對(duì)臨床感染株、非臨床感染株行pilA、hylEfm基因檢測，運(yùn)用基因測序?qū)﹃栃詳U(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。接合實(shí)驗(yàn)明確pilA、hylEfm在屎腸球菌間的傳遞方式，是否同時(shí)伴有耐藥基因傳遞。S1酶及I-CeuI酶法確認(rèn)pilA、hylEfm的質(zhì)?；蛉旧w定位。
　

4、　結(jié)果：4年臨床分離屎腸球菌感染株137株，檢查確認(rèn)120株攜帶有pilA基因，陽性率為88％，hylEfm陽性率為15％，pilA、hylEfm皆陽性率亦為15％。非臨床感染株中，住院患者腸道定植株、社區(qū)志愿者腸道定植株pilA的攜帶率分別為70％、52％，均未發(fā)現(xiàn)hylEfm基因攜帶。接合實(shí)驗(yàn)證實(shí)pilA、hylEfm基因均能通過質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移方式在不同菌株間進(jìn)行傳遞，并同時(shí)伴有耐藥性傳遞。Southern blot發(fā)現(xiàn)pilA與h