廣西巴馬小型豬動脈病變與ABCA1關系的初步研究.pdf

1、大動脈因血流速度快、血壓大等原因易出現內皮損傷。膽固醇代謝物質易粘附于損傷的血管內膜形成脂質沉積，血管發(fā)生堵塞及血栓形成，進而發(fā)展成為動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)。膽固醇代謝異常是動脈粥樣病變的主要原因。膽固醇逆轉運的限速蛋白ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)對膽固醇代謝尤為重要。ABCA1與動脈病變之間的作用及調控關系復雜，現已發(fā)現多種microRNA參與對膽固醇逆轉運及動脈粥樣硬化的調控。
　　本實

2、驗采用廣西巴馬小型豬為實驗材料，選取常規(guī)飼養(yǎng)豬4頭，飼以常規(guī)飼料作為對照組;選取高脂高糖飼喂豬，9頭飼以高脂高糖飼料作為實驗1組，5頭飼以高脂高糖高膽固醇作為實驗2組。實驗為期3個月，其間每月檢測血液生理生化指標，實驗結束時檢測動脈病理變化情況。克隆廣西巴馬小型豬ABCA1基因CDs并分析其生物學信息。檢測ABCA1 mRNA及蛋白在各組實驗豬主動脈、頸動脈、腹主動脈中的表達情況，同時檢測以ABCA1為靶基因的miRNA-33a、miR

3、NA-758在各組實驗豬肝臟中的表達情況。構建ABCA1真核表達載體并驗證其功能。通過以上實驗來探討動脈粥樣硬化過程中ABCA1與膽固醇代謝的變化及影響ABCA1表達的microRNAs的變化情況，并為制作轉ABCA1廣西巴馬小型豬奠定基礎。實驗結果顯示:
　　(1)實驗2組血清總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平均呈上升趨勢，實驗1組與對照組血清總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平無明顯差異。
　　(2)主動脈、頸

4、動脈、腹主動脈制作病理切片HE染色檢驗結果顯示，實驗1組和實驗2組各動脈均出現不同程度病變。實驗1組各動脈內膜增厚，中膜平滑肌細胞排列紊亂。實驗2組各動脈病變較實驗1組嚴重，內膜不平整，中膜增厚并出現巨噬細胞和泡沫細胞。
　　(3)實驗獲得的廣西巴馬小型豬ABCA1 CDs全長2856bp，編碼961個氨基酸，成熟蛋白無信號肽，ATP轉運體活性中心位于第602-834位氨基酸。
　　(4)qRT-PCR結果顯示:在主動脈和頸

5、動脈，實驗2組ABCA1 mRNA表達量顯著高于實驗1組和對照組(P＜0.05);在腹主動脈，實驗2組和實驗1組ABCA1 mRNA表達量均顯著高于對照組(P＜0.05)。免疫組化半定量分析結果顯示:在主動脈，ABCA1蛋白表達量實驗2組＞實驗1組＞對照組，但差異不顯著;在頸動脈，實驗1組和實驗2組ABCA1蛋白的表達量顯著高于對照組(P＜0.05);在腹主動脈，實驗2組ABCA1蛋白表達量顯著高于實驗1組(P＜0.05)，實驗1組顯著

6、高于對照組(P＜0.05)。免疫組化定位ABCA1蛋白在動脈內膜增厚區(qū)大量表達，且表達量隨病變程度的加劇而升高。
　　(5)qRT-PCR結果顯示實驗2組肝臟中ABCA1表達量顯著高于對照組1和對照組(P＜0.05)。miR-33a在實驗1組、實驗2組肝臟中的表達量均顯著低于對照組(P＜0.05)。miR-758在實驗1組肝臟中表達量顯著高于對照組(P＜0.05)，在實驗2組中顯著低于對照組(P＜0.05)。
　　(6)轉p

7、EGFP-N1-ABCA1的PK-15細胞可檢測到綠色熒光，且ABCA1 mRNA水平顯著上升。在胞質注射的豬卵母細胞分裂期和囊胚期均能檢測到綠色熒光。
　　結論:高脂高糖和高脂高糖高膽固醇均可誘導廣西巴馬小型豬動脈病變，后者引發(fā)的病變更為嚴重，說明高水平膽固醇可加速動脈病變進程;病變區(qū)ABCA1表達量更高，說明ABCA1主要在病變區(qū)發(fā)揮功能;高脂高糖可引發(fā)miRNA-33a下調，高膽固醇則可進一步引發(fā)miRNA-758的下調，以