Epac蛋白在大鼠肝纖維化模型中的動(dòng)態(tài)變化及意義.pdf

1、目的：
　　 1．觀察Epac在實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化。
　　 2．初步探討Epac與肝纖維化病程及TGFβ1的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 1．動(dòng)物分組：健康雄性Sprague-Dawley大鼠85只，分為2組，對(duì)照組10只，模型組60只。模型組造模后4d、1周、2周、4周、6周、8周分別隨機(jī)取6只處死。正常對(duì)照組予普通喂養(yǎng)至4w觀察生存情況并隨機(jī)取6只處死。模型組再留15只大鼠觀察造模后生

2、存情況。
　　 2．大鼠肝纖維化模型的建立：模型組大鼠給予0.5％DMN按0.2mL/100g體質(zhì)量腹腔內(nèi)注射，每周連續(xù)注射3d，持續(xù)4周。
　　 3．取材：相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)腹腔注射10％水合氯醛麻醉大鼠后開腹，經(jīng)門靜脈采血離心后留取上清液；取大鼠肝組織，置于10％中性甲醛溶液中固定，石蠟包埋，制各組織切片；另快速取部分肝組織液氮凍存，待制備組織勻漿。
　　 4．標(biāo)本檢測(cè)：采用HE和Masson染色觀察肝組織病理變化；

3、RT-PCR、免疫組化和蛋白免疫印跡法分別檢測(cè)Epacl、Epac2及TGFβ1mRNA及蛋白在造模過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化及肝組織中的定位；同時(shí)測(cè)定血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(Tbil)和白蛋白(Alb)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1．成功構(gòu)建大鼠肝纖維化模型。正常對(duì)照組和模型組4周時(shí)死亡率分別為0和20％。
　　 2．模型組血清ALT、AST升高，4周時(shí)達(dá)高峰(P＜0.05)；Al

4、b逐步下降，6周時(shí)最低(P＜0.05)。
　　 3．對(duì)照組肝組織中Epacl和Epac2蛋白主要表達(dá)于肝細(xì)胞胞質(zhì)。Epacl在造模后4d、1周表達(dá)下降，2周后開始升高，6周時(shí)達(dá)高峰(P＜0.05)。Epac2表達(dá)水平在模型組均下降，4周時(shí)達(dá)最低水平(P＜0.05)。TGFβ1在模型組表達(dá)增加，4周時(shí)最明顯(P＜0.05)。Epacl、Epac2和TGFβ1mRNA的變化趨勢(shì)與蛋白水平變化基本一致。
　　 4．相關(guān)分析顯示

5、Epacl與肝纖維化病程呈正相關(guān)(P＜0.01)，而Epac2與肝纖維化病程呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。Epacl與TGFβ1呈正相關(guān)(P＜0.01);Epac2與TGFβ1呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．Epacl、Epac2在正常SD大鼠肝臟中有表達(dá)。
　　 2．Epacl在二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化形成過(guò)程中呈先下降后升高趨勢(shì)，Epac2呈持續(xù)下降趨勢(shì)；Epac可能參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展