PGE2在BLM致大鼠肺纖維化模型中的變化及意義研究.pdf

1、目的：特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化((idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一種病因不明的彌漫性肺疾病，以炎癥反應(yīng)、成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白沉積為特點(diǎn)，病因眾多復(fù)雜。多發(fā)病于50歲后。肺功能顯示限制性通氣功能障礙和重度的彌散功能障礙，血?dú)夥治鲲@示嚴(yán)重的低氧血癥，且預(yù)后不良，患者最終多死于呼吸衰竭。其發(fā)病機(jī)制尚未明確，且無(wú)針對(duì)性的治療措施。目前的治療方法主要是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素或聯(lián)合免疫抑制劑。療效不理想，毒副作用

2、大。新的治療理念，方法及藥物顯得極為重要。人肺成纖維細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究表明，前列腺素E2(PGE2)能抑制成纖維細(xì)胞的增殖分化，膠原的合成。且可對(duì)腫瘤壞死因子α(TNF-α)，轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)致炎致纖維化產(chǎn)生負(fù)性影響。
　　本實(shí)驗(yàn)旨在用塞來(lái)昔布抑制博來(lái)霉素致大鼠纖維化模型中的前列腺素的合成。通過觀察肺組織內(nèi)前列腺素E2分布，并間接量化其含量，以及測(cè)量肺泡灌洗液中環(huán)磷腺苷(CAMP)TNF-α的表達(dá)水平，并做相關(guān)統(tǒng)計(jì)分

3、析，以觀察前列腺素E2(PGE2)在肺纖維化模型中的動(dòng)態(tài)變化，給予16，16二甲基前列腺素E2干預(yù)，并測(cè)定上述指標(biāo)進(jìn)一步論證PGE2在肺纖維化中的作用和可能存在的機(jī)制。
　　方法：選取清潔級(jí)健康、雄性SD大鼠(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)120只，體重220±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為4組對(duì)照組(NS組)：30只，氣管內(nèi)注入0.1ml/100g生理鹽水，之后第一天開始，用生理鹽水每日一次灌胃，同時(shí)用生理鹽水每日一次肌肉注

4、射，分別于7、14、28天各處死10只。(2)模型組(BLM組)：30只，于氣管內(nèi)一次性注入博來(lái)霉素(5mg/kg)，于造模后第一天開始給予生理鹽水每日灌胃一次，用生理鹽水每日肌肉注射一次。分別于7、14、28天處死。(3)塞來(lái)昔布(SL組)：30只，氣管內(nèi)一次性注入博來(lái)霉素(5mg/kg)，于造模后第七日用塞來(lái)昔布溶液(塞來(lái)昔布與生理鹽水配成5％溶液)250mg/kg灌胃，1次/d，同時(shí)用生理鹽水0.1ml/200g每日一次肌肉注射。

5、分別于7、14、28天處死。前六日均給予NS0.5ml/200g灌胃(4)16，16二甲基前列腺素E2組(PG組)氣管內(nèi)一次性注入博來(lái)霉素(5mg/kg)，于造模后第一日起給予16，16二甲基前列腺素E2肌肉注射(100ug/kg.d)，同時(shí)用生理鹽水0.5ml/200g每日一次灌胃。分別于7，14，28天處死。各組取右肺下葉固定于4％多聚甲醛溶液中，制作病理切片通過HE染色、Masson膠原染色來(lái)評(píng)價(jià)肺泡炎和肺纖維化的程度，并按照Sz

6、apiel法分為4級(jí)。用免疫組化法檢測(cè)PGE2，并用圖像分析系統(tǒng)半定量測(cè)定PGE2的平均積分光密度值，以此值來(lái)代替肺組織中PGE2的含量。右肺上葉制成勻漿測(cè)定肺組織中羥脯氨酸濃度，對(duì)左肺進(jìn)行肺泡灌洗，測(cè)定肺泡灌洗液中環(huán)磷腺苷(CAMP)TNF-α含量。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理并計(jì)較分析各組數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1肺組織病理分析結(jié)果：在同一時(shí)間點(diǎn)，BLM組肺泡炎高于NS(P<0.05)，BLM組纖維化程度各時(shí)間點(diǎn)亦顯

7、著高于NS組(P<0.05)。表明動(dòng)物模型復(fù)制成功。SL組14，28天肺泡炎及纖維化程度均高于BLM組(p<0.05)。7天時(shí)肺泡炎程度與BLM組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，纖維化程度較BLM組7天無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，14天，28天時(shí)均高于BLM組(p<0.05)。PG組各時(shí)間點(diǎn)肺泡炎及纖維化程度與BL組SL組均明顯減輕(P<0.05)。
　　2肺組織羥脯氨酸(HYP)含量變化：BLM組大鼠肺組織勻漿中HYP含量隨著造模時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，于28天達(dá)

8、高峰，與NS組比各時(shí)間點(diǎn)HYP含量均升高且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SL組大鼠HYP含量隨時(shí)間延長(zhǎng)呈增高趨勢(shì)，于28天達(dá)高峰。7天時(shí)與BLM組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，14天28天時(shí)均高于BLM組(p<0.05)。PG組與BLM組SL組各時(shí)間點(diǎn)比較HYP含量均減低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　3肺組織中PGE2含量變化：SL組大鼠肺組織中PGE2含量表達(dá)14天28天時(shí)均低于BLM組(p<0.05)，7天時(shí)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。B

9、LM組7天時(shí)與NS組比較是升高的，有統(tǒng)計(jì)差異(P<0.05)。但14天28天時(shí)低于NS組(P<0.05)，由于PG組加入了活化的前列腺素E2衍生物16，16二甲基前列腺素E2，免疫組化顯示各時(shí)間點(diǎn)均高于BLM組(p<0.05)。
　　4肺泡灌洗液中TNF-α，CAMP含量變化：BLM組各時(shí)間點(diǎn)與NS組比較TNF-α明顯增高(p<0.05).SL組大鼠肺組織中TNF-α表達(dá)量于14、28天均高于BLM組(p<0.05)，PG組與BL

10、M組比較各時(shí)間點(diǎn)TNF-α的含量是降低的(p<0.05)。7天時(shí)各組CAMP比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而于14天28天時(shí)BLM組顯著低于NS組(p<0.05)，SL組低于BLM組(p<0.05)。PG組與BLM組比較14天28天時(shí)均升高(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1應(yīng)用博來(lái)霉素氣管內(nèi)給藥，可引起明顯的肺泡炎和肺纖維化，復(fù)制肺纖維化模型具有可行性。
　　2肺纖維化動(dòng)物與正常動(dòng)物比較在炎癥損傷期肺組織PGE2含量升高，而

11、在纖維化形成過程中及纖維化后期肺組織中PGE2含量降低。纖維化肺組織肺泡灌洗液中CAMP含量降低，TNF-α含量是升高的。
　　3 PGE2可能為纖維化保護(hù)因子。其抑制TNF-α的合成，增加CAMP的含量可能為其保護(hù)作用的重要機(jī)制。
　　4在早期肺泡炎程度無(wú)明顯差異的情況下，抑制PGE2合成可使肺纖維化加重，炎癥并非肺纖維化發(fā)生發(fā)展存在的充分必要條件，纖維化加重可獨(dú)立于炎癥情況改變而發(fā)生。
　　5應(yīng)用16，16二甲基前