β-catenin在肺纖維化小鼠中的動態(tài)表達及意義.pdf

1、目的:
　　 觀察β-連環(huán)蛋白(β-catenin,β-cat)在博萊霉素(bleomycin,BLM)致小鼠肺纖維化模型中各期的表達和可溶性Frizzled相關蛋白(SFRP4)干預后其表達的變化,進一步探討其在肺纖維化上皮-間充質轉化(epitelial-mesenchymaltransition,EMT)中的作用,從而更深入地了解肺纖維化的發(fā)病機制。
　　 方法:
　　 將60只小鼠按隨機數(shù)字表法分為3組:

2、對照組(Cont組)、實驗組(BLM組)和可溶性Frizzled相關蛋白干預組(SFRP4組),每組20只。其中BLM組和SFRP4組為博來霉素誘導的肺纖維化模型組(氣管內注射BLM5mg·kg-1,0.04ml),每組20只;Cont組為正常對照組(Cont組,20只),同時間按同樣方法氣管內注入等體積(0.04ml)生理鹽水。造模后于第2、4、6、8、10天,SFRP4組小鼠分別腹腔注射PBS稀釋的SFRP4(10μg/ml)約0.

3、2ml。Cont組及BLM組腹腔注射等體積生理鹽水,每天1次。各組分別于第3、7、14和28天各處死5只小鼠,取肺組織做病理切片,用蘇木精-伊紅(HE)染色觀察小鼠肺泡炎癥和肺纖維化的程度,以樣本堿水解法檢測肺組織中羥脯氨酸(HYP)含量;免疫組化檢測不同組β-cat、間充質細胞標記物α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)及上皮細胞標記物上皮鈣黏素(E-cadherin,E-cad)的表達,并應用WesternBlot法測定β-cat、α-S

4、MA及E-cad的表達。
　　 結果:
　　 (1)Cont組的小鼠肺組織病理學檢查無明顯改變,僅炎性細胞少量浸潤,無肺泡炎性滲出,肺泡間隔無增厚,沒有成纖維細胞的增殖,無明顯的肺纖維化樣的改變。BLM組肺組織病理切片隨時間順序呈現(xiàn)由肺泡炎至纖維化的動態(tài)改變,早期帥泡炎性滲出較重,肺泡間隔中有大量的炎性細胞浸潤,肺泡結構變形。中晚期炎性滲出逐漸減輕,肺泡萎陷、消失,大小不等,但肺泡間隔逐漸增厚,可見成纖維細胞的大量增殖,

5、大量寬帶狀及片狀膠原纖維沉積,出現(xiàn)彌漫性纖維化病變;BLM組的腫泡炎和肺纖維化評分均高于對照組和治療組,有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01);SFRP4組病理學檢查也按時間順序呈現(xiàn)由肺泡炎到肺纖維化的動念改變,但肺泡炎和肺纖維化的程度辦較BLM組為輕(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 (2)BLM組與Cont組相比,肺組織中羥基脯氨酸含量第7天開始上升,第28天達到峰值;與BLM組對照,在第7、14、28天時,SFRP

6、4組與其有顯著差異(P＜0.01)。
　　 (3)免疫組化示:E-Cad及α-SMA的表達主要在細胞膜上,與Cont組相比,各時間點BLM組及SFRP4組的E-Cad蛋白表達減少,并呈逐漸減少的趨勢,而α-SMA蛋白表達則增多,并隨著時問的推移其表達逐漸增多。Β-cat其大部分位于細胞膜上,而很少一部分位于細胞質和細胞核中。與Cont組相比,BLM組及SFRP4組各時間點β-cat蛋白在細胞質及細胞核內的表達逐漸增加,BLM組較

7、SFRP4組較為顯著。
　　 (4)Westernblot示:Cont組小鼠各時間點α-SMA及E-cad蛋白表達差異均無顯著性意義。BLM組α-SMA從3天起其表達逐漸增加,與Cont組相比,P＜0.01,而E-cad蛋白表達隨時間增加而逐漸減少,與Cont組相比,P＜0.01;SFRP4組α-SMA的表達亦呈逐漸增加趨勢,但較BLM組為輕,與BLM組相比,第14、28天P＜0.05,E-cad蛋白表達隨時間增加亦逐漸減少,但

8、同時間點表達較BLM組表達為多,與BLM組相比,第7、14、28天P＜0.05。
　　 (5)Westernblot示:Cont組小鼠各時間點β-cat蛋白表達差異亦均無顯著性意義。與Cont組相比較,BLM組β-cat的表達從第3天開始增高(P＜0.05),第14天達到高峰,第28天降低:SFRP4組β-cat的表達先增高后下降,但各時間點均高于Cont組(P＜0.01)。與BLM組相比較,SFRP4組,β-cat的表達均下降

9、,其差異在第7、14、28天有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 (6)β-cat蛋白、α-SMA及E-cad蛋白的表達與肺纖維化上皮-間充質轉化可能有一定聯(lián)系,其中β-cat及α-SMA蛋白的表達與其呈正相關,E-cad蛋白的表達與其呈負相關。
　　 結論:
　　 β-catenin在肺纖維化形成過程中存在高表達。同時在肺纖維化進程中肺泡上皮細胞進行性減少,間質細胞逐漸增加,反映在作為上皮細胞標記物上皮鈣黏素(