漠斑牙鲆性分化及性別控制技術(shù)的初步研究.pdf

1、漠斑牙鲆(ParalichthysLethostigma)，是一種具有較高營養(yǎng)價(jià)值和商業(yè)捕撈價(jià)值的優(yōu)良魚種，其餌料轉(zhuǎn)化率高，養(yǎng)殖成本低，是進(jìn)行人工增養(yǎng)殖的名優(yōu)品種。本論文以工廠化養(yǎng)殖漠斑牙鲆為研究對(duì)象，以組織切片法為監(jiān)測手段，對(duì)養(yǎng)殖漠斑牙鲆性腺分化、溫度和激素誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)、人工雌核發(fā)育等方面進(jìn)行了初步研究和探討，所得結(jié)果如下：
　　 1.漠斑牙鲆性腺分化的組織學(xué)觀察
　　 本試驗(yàn)采用組織學(xué)和形態(tài)學(xué)觀察手段，對(duì)0日齡初孵仔魚

2、～270日齡漠斑牙鲆成魚的性腺分化和發(fā)育情況進(jìn)行跟蹤觀察，以期補(bǔ)充和完善漠斑牙鲆性腺發(fā)育的有關(guān)資料，為單性苗種的制種和培育提供技術(shù)參考。結(jié)果表明：在水溫20±0.5℃條件下，漠斑牙鲆孵化后10日齡，全長4.0±0.36mm時(shí)，PGCs呈橢圓形，體積大，核大，核膜明顯，剛出現(xiàn)生殖嵴；35日齡，全長16.9±0.84mm時(shí)，PGCs細(xì)胞聚集，從體壁游離出來，進(jìn)入腹腔后部，此時(shí)生殖嵴的大小開始分化，大的生殖嵴迅速增大，生殖細(xì)胞開始有絲分裂，生

3、殖細(xì)胞數(shù)目迅速增多，逐漸形成了原始性腺。85日齡，全長5.9±0.32cm，部分性腺中開始出現(xiàn)生殖細(xì)胞的有絲分裂，形成成簇發(fā)育的PGCs群，其中少數(shù)發(fā)育成為卵母細(xì)胞，標(biāo)志著性腺形態(tài)學(xué)分化的開始。120日齡，全長8.3±0.81cm，漠斑牙鲆卵巢的上下兩緣不斷延伸，形成分化的兩支，開始形成卵巢腔，同時(shí)形成數(shù)個(gè)生殖板。180日齡，全長13.4±1.2cm時(shí)，卵巢分化完成。漠斑牙鲆精巢分化晚于卵巢，130日齡，全長為6.3±0.52cm時(shí)，原

4、始性腺中精原細(xì)胞有絲分裂開始，性腺體積增大，生殖上皮細(xì)胞明顯；160日齡，全長為6.8±0.56cm時(shí)，精小管原基出現(xiàn)，標(biāo)志著精巢分化開始；200日齡，全長為8.7±0.93cm時(shí)，精小葉和輸精管等結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，輸精管的出現(xiàn)標(biāo)志著精巢分化的完成；240日齡，全長為10.3±1.1cm時(shí)，精巢中精小葉，精母細(xì)胞，精小管等結(jié)構(gòu)明顯，漠斑牙鲆雄魚進(jìn)入成熟發(fā)育期。漠斑牙鲆由原始性腺逐漸發(fā)育分化為不同結(jié)構(gòu)和功能的卵巢或精巢，在無外界因素干擾下，分化后

5、的分化類型穩(wěn)定不變，此種性腺分化類型的漠斑牙鲆屬于雌雄異體的分化型魚類。
　　 2.真鯛冷凍精子誘導(dǎo)漠斑牙鲆減數(shù)雌核發(fā)育研究
　　 本文采用紫外線(UV)滅活的冷凍真鯛精子激活漠斑牙鲆卵子發(fā)育，冷休克法抑制第二極體排出，成功獲得雌核發(fā)育雜合二倍體仔魚。試驗(yàn)結(jié)果顯示：冷凍真鯛精子適宜的UV滅活劑量為72mJ/cm2，隨著處理時(shí)間(0～100s)延長，已滅活精子受精后的胚胎孵化率呈哈特維希效應(yīng)，40s滅活組胚胎孵化率達(dá)到最高

6、29±1.9％，單倍體率100％。冷休克處理溫度0～2℃，起始時(shí)刻3min、持續(xù)時(shí)間45min時(shí)，胚胎的二倍體孵化率最高9.4±0.71％。雌核發(fā)育后代經(jīng)流式細(xì)胞儀、形態(tài)學(xué)觀察和染色體倍性鑒定，均為二倍體(2n=48)，未發(fā)現(xiàn)單倍體和非整倍體現(xiàn)象。胚胎發(fā)育時(shí)序跟蹤觀察表明冷休克組和單倍體組發(fā)育同比正常孵化組時(shí)間(49h45min)差異顯著，分別歷時(shí)64h59min和55h49min。雌核發(fā)育二倍體與正常仔魚數(shù)量形狀差異不顯著(P>0.0

7、5)，但單倍體仔魚明顯畸形，與正常組和雌核組仔魚在上述指標(biāo)上存在顯著差異(P<0.05)。
　　 3.環(huán)境因子對(duì)漠斑牙鲆性腺分化的影響
　　 在漠斑牙鲆孵化后40～160日齡期間，以17α-甲基睪酮(17α-MT)和17β-雌二醇(17β-Estradiol)為誘導(dǎo)因子，分別設(shè)置20、60、80、100μg/L4種濃度梯度，采用浸泡法處理實(shí)驗(yàn)樣本，160日齡后轉(zhuǎn)入正常水體養(yǎng)殖至200日齡，每組分別取樣以石蠟組織切片法鑒定

8、表型性別，結(jié)果顯示：60μg/L、80μg/L、100μg/L的MT浸浴處理都能顯著提高群體中的雄性比例，分別達(dá)到78.5％(P<0.05)、83.4％(P<0.05)、87.3％(P<0.05)。17β-Estradiol各試驗(yàn)組雌性化比例差異不明顯，雌性比例分別為58.2％、66.8％、71.3％、71.8％。同批漠斑牙鲆孵化后每組隨機(jī)選取120尾進(jìn)行溫度誘導(dǎo)研究，分別精確控溫至14℃，18℃，22℃(正常對(duì)照組)，26℃，32℃溫

9、度培養(yǎng)至160日齡，轉(zhuǎn)到21-23℃正常水溫養(yǎng)殖至200d，石蠟組織切片鑒定性別，結(jié)果表明：26℃和32℃高溫能明顯提高群體中的雄性比例，使其分別達(dá)到66.3％(0.010.05)和58.8％(P>0.05)；對(duì)照組群體中雌雄個(gè)體比例接近1:1。溫度能促使漠斑牙鲆原始性腺向雄性方向分化，因此該魚屬于溫度依賴型性別決定