苦瓜性別分化相關(guān)分子標(biāo)記的研究.pdf

1、苦瓜(Momordica charantia.L)是葫蘆科苦瓜屬的一年生蔓生植物，雌雄同株。苦瓜在全國廣泛栽培，是一種重要的蔬菜，而且具有藥用價(jià)值。 目前，分子標(biāo)記被廣泛應(yīng)用于植物的親緣關(guān)系分析、種質(zhì)鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建、目標(biāo)基因定位、輔助育種等各個(gè)方面，但在苦瓜方面的應(yīng)用較少。本試驗(yàn)采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random AmpIified Polymorphism DNA，RAPD)技術(shù)和簡單重復(fù)間序列標(biāo)記(inter-sim

2、pIe sequence repeat，ISSR)技術(shù)，研究與苦瓜性別連鎖的分子標(biāo)記。研究結(jié)果如下： 1．用CTAB改良方法可以快速提取苦瓜基因組DNA，其濃度和純度達(dá)到了RAPD和ISSR分子標(biāo)記試驗(yàn)的要求。 2．優(yōu)化苦瓜RAPD體系，從200條隨機(jī)引物中篩選出8條可能與性別連鎖的RAPD標(biāo)記。利用全雌、強(qiáng)雌和強(qiáng)雄個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)引物S30所擴(kuò)增的約550bp的譜帶和S66所擴(kuò)增的約450bp的譜帶在所有的全雌性個(gè)體

3、都出現(xiàn)，而在所有強(qiáng)雌和強(qiáng)雄個(gè)體中都不出現(xiàn)，初步表明這兩條是與雌性緊密連鎖的RAPD分子標(biāo)記。 3．把RAPD雌性特異條帶S30<,550>克隆轉(zhuǎn)化為特異穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記SR<,550>，說明S30<,550>與苦瓜雌性基因連鎖。 4．利用ISSR技術(shù)進(jìn)行苦瓜性別的研究，建立苦瓜ISSR-PCR反應(yīng)體系，得到清晰的ISSR指紋圖譜。 5．從100條ISSR引物中篩選出7條可能與性別連鎖的ISSR標(biāo)記。利用全雌、強(qiáng)