咖啡酸苯乙酯與四甲基尿酸抗鎘致小鼠糖尿病腎病作用的研究.pdf

1、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的并發(fā)癥之一，20％的患者最后將發(fā)展成為DN。DN的發(fā)病機(jī)制很復(fù)雜，環(huán)境因素特別是環(huán)境中的腎臟毒性物質(zhì)鎘能夠誘導(dǎo)DN的發(fā)生，對糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展具有重要的作用。
　　代謝組學(xué)是一門系統(tǒng)研究隨著外界刺激和遺傳修飾下機(jī)體代謝應(yīng)答及隨時(shí)間變化規(guī)律的學(xué)科。代謝組學(xué)與常規(guī)檢測方法相比具有高通量、高靈敏度及高特異性，為DN的診斷開辟了新的途徑。代謝組學(xué)通過研究疾病以及服藥

2、后機(jī)體內(nèi)源性代謝物的變化，探索其代謝途徑，進(jìn)而闡述疾病的發(fā)病機(jī)理和藥物的作用機(jī)制。
　　本研究擬采用氯化鎘與高脂高糖聯(lián)合喂養(yǎng)，構(gòu)建糖尿病腎病小鼠模型，蜂膠活性成分咖啡酸苯乙酯(CAPE)及苦茶活性成分四甲基尿酸(TC)作為保護(hù)藥物，通過生理生化指標(biāo)及組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行模型驗(yàn)證。利用代謝組學(xué)分析技術(shù)超高效液相-飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC/QTOF），對空白組、糖尿病腎病模型組及不同藥物保護(hù)組的血清進(jìn)行了代謝物譜的分析，采用多元統(tǒng)計(jì)分析尋找鎘

3、誘發(fā)糖尿病腎病的潛在生物標(biāo)記物。同時(shí)，對糖尿病腎病小鼠的發(fā)病機(jī)制及天然活性成分的保護(hù)機(jī)制進(jìn)行初步的探討，本研究為糖尿病腎病的臨床診斷及藥物的開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　(1) DN模型的建立及生化指標(biāo)的檢測
　　昆明小鼠經(jīng)氯化鎘與高脂高糖聯(lián)合喂養(yǎng)12周后，經(jīng)生理生化指標(biāo)及腎臟形態(tài)學(xué)分析模型構(gòu)建成功。生化指標(biāo)結(jié)果檢測表明血清TG、TC、NAG及LDL-C較空白組相比，糖尿病腎病模型組顯著升高(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.0

4、，1，p＜0.05)，HDL-C較空白組(p＜0.05)，DN模型組明顯下降，說明鎘及高糖飼料聯(lián)合處理對小鼠造成了損傷，給予CAPE及TC治療后，其損傷得到了明顯的改善，說明鎘能夠誘發(fā)DN的發(fā)生，CAPE及TC對鎘誘發(fā)的DN具有一定的保護(hù)作用。
　　(2)糖尿病腎病模型小鼠給藥前后血清代謝物譜的UPLC-Q-TOF分析
　　采用UPLC-Q-TOF對空白組、DN模型組及保護(hù)組血清進(jìn)行檢測，通過主成分分析等模式識別方法對空白組

5、、DN模型組及保護(hù)組血清代謝物譜進(jìn)行分類并尋找與DN有關(guān)的生物標(biāo)記物。結(jié)果表明，三個(gè)樣本組小鼠實(shí)現(xiàn)完全分離，同時(shí)DN模型組小鼠血清花生四烯酸、8-表氧-前列腺素、LysoPC(18∶1)、Dg較空白組明顯增加，PS較空白組相比顯著下降，在給予CAPE及TC干預(yù)后，結(jié)果顯示LysoPC(18∶1)、花生四烯酸、8-表氧-前列腺素有所下降?；ㄉ南┧?、8-表氧-前列腺素可能與鎘誘發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激有關(guān)。
　　(3)糖尿病腎病小鼠發(fā)病機(jī)理

6、的研究
　　對各組小鼠腎臟氧化指標(biāo)（蛋白羰基化、脂質(zhì)過氧化）、炎癥因子（一氧化氮）及抗氧化體系（超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、過氧化氫酶）進(jìn)行檢測，結(jié)果表示DN模型組腎臟氧化指標(biāo)MDA、NO、PCO含量顯著高于空白組((p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001))，抗氧化酶SOD、GSH、CAT活性明顯低于空白組(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.05)，給予CAPE和TC治療后氧化指標(biāo)的上升得到抑制，抗氧化酶活性出現(xiàn)上升。鎘誘導(dǎo)