霉酚酸酯防治早期糖尿病腎病的實驗研究.pdf

1、目的：本研究旨在進一步探討MMF對糖尿病大鼠腎組織的保護作用，為MMF應用于臨床治療DN提供實驗依據(jù)，具有重要的理論意義和實用價值。 方法： 1、腎小球系膜細胞分別培養(yǎng)于不同糖濃度環(huán)境中，采用MTT比色法觀察系膜細胞(mesangial eells，MCs)的增殖情況；選用30mmol/L葡萄糖刺激體外培養(yǎng)的大鼠MCs增殖，加入不同濃度的MPA(10，25，50um0l/L)，觀察6、12、24、48h系膜細胞的增殖情況

2、；放射免疫法測定細胞上清液中Ⅳ型膠原的含量；ELISA法測定細胞上清液中MCP-1的含量：熒光實時定量PCR法測定細胞中TGF-B、CTGF及MCP-1mRNA的表達。 2、雄性Wistar大鼠行右腎切除后，腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，65mg/kg)誘發(fā)糖尿病模型。將實驗動物隨機分為右腎切除對照組(NC)、糖尿病組(DM)，霉酚酸酯治療組(DM.M)，纈沙坦治療組(DM.V)，纈沙坦和霉酚酸酯聯(lián)合治療組(DM.V.M)；治療組

3、分別給予MMF15mg.kg-1.d-1，纈沙坦40mg.kg-1.d-1；聯(lián)合治療組給予纈沙坦40mg.kg-1.d-1+MMF15mg.kg-1.d-1(MMF先溶解在5﹪二甲基亞砜中)，均用5g/L羧甲基纖維素鈉配成所需濃度，1ml/d灌胃。檢測各組8 w末的左腎重/體重比值、24h尿蛋白(LJpro)、血糖(BG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肌酐清除率(Ccr)；光鏡及電鏡觀察腎組織形態(tài)學變化；免疫組化檢測腎組織中ne

4、phrin，desmin及MCFL1表達，real time-PCR測定腎組織中rlephrin及MCP-1mRNA表達。 3、將實驗動物隨機分為右腎切除對照組(NC)、糖尿病組(DM)，霉酚酸酯治療組(DM.M，MMF15mg.kg-1.d-1)，觀察MMF對腎小管一間質(zhì)的影響，免疫組化檢測腎組織中MSP-1、OPN、M-CSF及CD68表達， real time-PCR測定腎組織中MCP-1及OPN mRNA表達。

5、結論： 1、高糖在一定濃度和時段內(nèi)有刺激大鼠MCs增殖的效應，MMF3對高糖所致MCs增殖具有抑制作用，且隨MMF劑量增大，刺激時間的延長，抑制作用增強。 2、高糖使腎小球系膜細胞趨化因子MCP-1基因和蛋白表達增高，致纖維化因子TGF-B和CTGFmRNA表達增加；MMF可抑制MCP-1的表達，降低Ⅳ型膠原的含量，下調(diào)TGF-B和CTGFmRNA表達，減少細胞外基質(zhì)，對糖尿病腎病具有一定的防治作用。 3、MMF

6、及纈沙坦均能減少糖尿病大鼠。腎組織中MCP-1、desmin及MCP-1mRNA的表達，上調(diào)Nephrin基因及蛋白表達，降低蛋白尿，預防腎損傷，但聯(lián)合治療不優(yōu)于單一治療。MMF對DN大鼠早期具有明顯的保護作用，可能通過抗炎反應減輕足細胞損傷，減少蛋白尿，保護腎功能。 4、糖尿病大鼠腎小管間質(zhì)MCP-1、OPN、M-CSF及CD68的表達較對照組大鼠明顯增高，進一步證實炎癥反應與DN發(fā)生有關。 5、 MMF治療后糖尿病大