槲皮素活化mTOR信號通路過對L929成纖維細胞的增殖的影響.pdf

1、創(chuàng)面愈合包括連續(xù)而又相互重疊的3個階段,即炎癥期、肉芽組織形成期和瘢痕形成期。創(chuàng)面愈合機制尚不完全清楚,目前認(rèn)為,創(chuàng)面局部的成纖維細胞和表皮細胞的分裂繁殖速度減慢和細胞外基質(zhì)合成減少、分解加速是創(chuàng)面經(jīng)久不愈的病理基礎(chǔ)。表皮細胞生長因子、血小板源性生長因子(PDGF)、TGF-β、bFGF和VEGF等促進傷口愈合的細胞生長因子及E-選擇素,細胞內(nèi)黏附分子-1,血管細胞黏附分子-1等黏附分子的合成和分泌減少,包括膠原酶在內(nèi)的各種金屬蛋白酶的

2、合成和分泌增加是導(dǎo)致慢性難愈性創(chuàng)面病理變化的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。如能有效誘導(dǎo)創(chuàng)面局部成纖維細胞、表皮細胞的增殖和分泌功能的增加,合成分泌傷口愈合促愈因子,則可達到治療慢性創(chuàng)面愈合的目的。
　　 目的:以皮膚L929成纖維細胞為研究對象,探討槲皮素對該細胞體外增殖的影響,進而探討其作用可能機制。
　　 研究方法:MTT法檢測細胞存活率;螢火蟲熒光素酶(fireflylucferase,LUC)報告基因?qū)嶒灆z測蛋白質(zhì)翻譯水平;蛋

3、白印跡法檢測mTOR通路蛋白的變化。
　　 研究結(jié)果:①不同濃度槲皮素(1、1.5、2、2.5×10-4M/L)對L929成纖維細胞均有增殖抑制作用,與濃度相關(guān);②Steady-Glo(R)熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)結(jié)果顯示:2.5×10-4M/L槲皮素與對照組相比,RLU(相對光單位)值明顯增加(P＜0.001)。③2.5×10-4M/L槲皮素作用L929細胞36 h后,對照組和2.5×10-4M/L槲皮素組均表達p-4E-BP

4、1、mTOR、cyclinD1蛋白的特異性條帶,與對照組相比,2.5×10-4M/L槲皮素組條帶寬度和亮度都明顯增加。100ng/ml的雷帕霉素作用于成纖維細胞36h后,P-4E-BP1、mTOR、cyclinD1蛋白表達,與對照組相比,2.5×10-4M/L槲皮素組條帶寬度和亮度都明顯增加,雷帕霉素組明顯減少,100ng/ml的雷帕霉素+2.5×10-4M/L槲皮素組條帶明顯增加,但較槲皮素組有所減少。
　　 研究結(jié)論:槲皮素