槲皮素對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β-,1-誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖及肌動(dòng)蛋白-α表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究槲皮素(Que)對(duì)體外培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的新生 SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞(CBFs)增殖及肌動(dòng)蛋白-α(α-SMA)表達(dá)的影響,探討槲皮素抑制心肌纖維化的作用機(jī)制。方法:1.心肌成纖維細(xì)胞分離、培養(yǎng)與鑒定:用胰酶消化組織分離細(xì)胞,差速貼壁法純化獲得心室肌成纖維細(xì)胞為材料,用光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定細(xì)胞。2.檢測(cè)方法:采用WST-1檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞增殖情況,采用流式細(xì)胞儀分析對(duì)心肌成纖維細(xì)胞周

2、期的影響,免疫細(xì)胞化學(xué)染色(SABC法)觀察心肌成纖維細(xì)胞的α-SMA的表達(dá)情況。3.實(shí)驗(yàn)分組:將心肌成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,根據(jù)不同的藥物及藥物的不同濃度,將實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分。第一部分:觀察Que對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的心肌成纖維細(xì)胞是否有影響。共分四個(gè)組:空白對(duì)照組及不同濃度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)組。第二部分:觀察Que對(duì) TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞的增殖及α-SMA表達(dá)的影響。共分為五個(gè)組

3、:空白對(duì)照組,TGF-β1誘導(dǎo)增殖對(duì)照組,不同濃度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)+TGF-β1組,TGF-β1的終濃度為5μg/L。第三部分:觀察 Que對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期影響共分為四個(gè)組:TGF-β1誘導(dǎo)增殖對(duì)照組,不同濃度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)+TGF-β1組,TGF-β1的終濃度為5μg/L。(4)數(shù)據(jù)處理:用SPSS

4、13.0軟件包；細(xì)胞活度OD值數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,單因數(shù)方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,卡方檢驗(yàn),兩兩比較采用標(biāo)準(zhǔn)四格表法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法鑒定為心肌成纖維細(xì)胞,純度95％以上。2.Que在基礎(chǔ)狀態(tài)下對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的增殖無明顯抑制作用。Que各濃度組(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)的 OD值與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P>

5、0.05)。3.QUE呈濃度依賴性地抑制 TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖作用,QUE各濃度組 OD值明顯低于 TGF-β1組(P<0.05),OD值隨QUE濃度的增加而減少,各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.QUE呈濃度依賴性阻止TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞由 G0/G1期進(jìn)入S期,QUE各濃度組S期的細(xì)胞數(shù)明顯低于TGF-β1組(P<0.05)；5.QUE呈濃度依賴性地抑制TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)

6、胞的α-SMA上調(diào),QUE各濃度組平均積分光密度(AIOD)值明顯低于TGF-β1組(P<0.01),AIOD值隨QUE濃度的增加而減少,各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論:1.QUE對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞增殖無明顯地抑制作用,但呈濃度依賴性對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖的有一定地抑制作用,表明QUE對(duì)應(yīng)激狀態(tài)下的心肌成纖維細(xì)胞增殖有一定地抑制效應(yīng)；2.QUE呈濃度依賴性阻止 TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖