槲皮素對轉(zhuǎn)化生長因子-β-,1-誘導的大鼠心肌成纖維細胞增殖及肌動蛋白-α表達的影響.pdf

1、目的:研究槲皮素(Que)對體外培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導的新生 SD大鼠心肌成纖維細胞(CBFs)增殖及肌動蛋白-α(α-SMA)表達的影響,探討槲皮素抑制心肌纖維化的作用機制。方法:1.心肌成纖維細胞分離、培養(yǎng)與鑒定:用胰酶消化組織分離細胞,差速貼壁法純化獲得心室肌成纖維細胞為材料,用光學顯微鏡和免疫細胞化學的方法鑒定細胞。2.檢測方法:采用WST-1檢測心肌成纖維細胞增殖情況,采用流式細胞儀分析對心肌成纖維細胞周

2、期的影響,免疫細胞化學染色(SABC法)觀察心肌成纖維細胞的α-SMA的表達情況。3.實驗分組:將心肌成纖維細胞傳代培養(yǎng)后,根據(jù)不同的藥物及藥物的不同濃度,將實驗分為三個部分。第一部分:觀察Que對基礎狀態(tài)下的心肌成纖維細胞是否有影響。共分四個組:空白對照組及不同濃度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)組。第二部分:觀察Que對 TGF-β1誘導的心肌成纖維細胞的增殖及α-SMA表達的影響。共分為五個組

3、:空白對照組,TGF-β1誘導增殖對照組,不同濃度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)+TGF-β1組,TGF-β1的終濃度為5μg/L。第三部分:觀察 Que對TGF-β1誘導的心肌成纖維細胞的細胞周期影響共分為四個組:TGF-β1誘導增殖對照組,不同濃度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)+TGF-β1組,TGF-β1的終濃度為5μg/L。(4)數(shù)據(jù)處理:用SPSS

4、13.0軟件包；細胞活度OD值數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示,單因數(shù)方差分析進行統(tǒng)計學處理,卡方檢驗,兩兩比較采用標準四格表法,檢驗水準為P<0.05有統(tǒng)計學意義。結果:1.培養(yǎng)的細胞經(jīng)過光學顯微鏡和免疫細胞化學染色的方法鑒定為心肌成纖維細胞,純度95％以上。2.Que在基礎狀態(tài)下對心肌成纖維細胞的增殖無明顯抑制作用。Que各濃度組(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)的 OD值與空白對照組比較無顯著性差異(P>

5、0.05)。3.QUE呈濃度依賴性地抑制 TGF-β1誘導的心肌成纖維細胞增殖作用,QUE各濃度組 OD值明顯低于 TGF-β1組(P<0.05),OD值隨QUE濃度的增加而減少,各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4.QUE呈濃度依賴性阻止TGF-β1誘導的心肌成纖維細胞由 G0/G1期進入S期,QUE各濃度組S期的細胞數(shù)明顯低于TGF-β1組(P<0.05)；5.QUE呈濃度依賴性地抑制TGF-β1誘導的心肌成纖維細

6、胞的α-SMA上調(diào),QUE各濃度組平均積分光密度(AIOD)值明顯低于TGF-β1組(P<0.01),AIOD值隨QUE濃度的增加而減少,各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結論:1.QUE對基礎狀態(tài)下心肌成纖維細胞增殖無明顯地抑制作用,但呈濃度依賴性對TGF-β1誘導的心肌成纖維細胞增殖的有一定地抑制作用,表明QUE對應激狀態(tài)下的心肌成纖維細胞增殖有一定地抑制效應；2.QUE呈濃度依賴性阻止 TGF-β1誘導的心肌成纖