MicroRNA-200a調控心肌成纖維細胞增殖活化的機制研究.pdf

1、目的：
　　心房顫動（Atrial fibrillation，AF）是一種非常常見的、慢性持續(xù)性心律失常，具有極高的發(fā)病率和致死率，并且能夠引發(fā)或者加重心力衰竭，是導致休克的一個重要因素。目前為止，房顫發(fā)展的潛在機制尚未被完全闡釋清楚。MicroRNAs(miRNAs)為一大量的小非編碼RNA亞組，調節(jié)基因表達并且在廣泛的生物過程發(fā)揮著重要的作用。臨床上,有越來越多的證據表明miRNAs作為生物標志物能夠起到潛在的診斷作用。本研究

2、目的在于在評估m(xù)icroRNA-200a及其靶基因沉默信息調節(jié)因子1（silent information regulator1，SIRT1）在大鼠房顫纖維化模型中的表達改變，闡釋microRNA-200a mimics對大鼠心肌成纖維細胞活化增殖的影響，進一步明確microRNA-200a在心肌纖維化過程中發(fā)揮作用的分子機制。
　　方法：
　　構造 Sprague-Dawley大鼠房顫心肌纖維化模型采用下腹部皮下注射鹽酸異

3、丙腎上腺素的方法。隨機將80只無特定病原體級SD大鼠分為實驗組和對照組，每組各40只。實驗組大鼠進行下腹部皮下注射ISO，空白組大鼠予以下腹部皮下相同量生理鹽水注射，處死取出心臟，獲得標本。通過 LipofectamineTM2000 Reagent試劑轉染microRNA-200a mimics入體外培養(yǎng)大鼠心肌成纖維細胞，36~48 h后評估各項指標。HE染色法和Masson染色法觀測各組心臟標本中的心肌纖維化程度及膠原容積分數（C

4、VF）；qRT-PCR法測定各組microRNA-200a、SIRT1和α-SMA的mRNA表達情況；Western blot法測定各組SIRT1和α-SMA表達；MTT法檢測microRNA-200a mimics對心肌成纖維細胞活化、增殖的影響。
　　結果：
　　兩組對比，HE染色和Masson染色結果顯示實驗組SD大鼠標本間質中出現明顯的膠原纖維增生，實驗組心肌間質膠原容積分數（CVF）發(fā)生明顯的增加改變。與空白對照組

5、比較，實驗組 microRNA-200a表達下降，SIRT1以及α-SMA mRNA水平表達增高，SIRT1以及α-SMA蛋白水平表達增高；瞬時轉染microRNA-200a mimics后，與空白對照組、陰性對照組比較，microRNA-200a表達增高，SIRT1 mRNA表達水平降低；瞬時轉染microRNA-200a mimics，心肌成纖維細胞活性下降。
　　結論：
　　皮下注射 ISO能使 SD大鼠心臟發(fā)生明顯的