MicroRNA-200a調(diào)控心肌成纖維細(xì)胞增殖活化的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　心房顫動(dòng)（Atrial fibrillation，AF）是一種非常常見的、慢性持續(xù)性心律失常，具有極高的發(fā)病率和致死率，并且能夠引發(fā)或者加重心力衰竭，是導(dǎo)致休克的一個(gè)重要因素。目前為止，房顫發(fā)展的潛在機(jī)制尚未被完全闡釋清楚。MicroRNAs(miRNAs)為一大量的小非編碼RNA亞組，調(diào)節(jié)基因表達(dá)并且在廣泛的生物過程發(fā)揮著重要的作用。臨床上,有越來越多的證據(jù)表明miRNAs作為生物標(biāo)志物能夠起到潛在的診斷作用。本研究

2、目的在于在評(píng)估m(xù)icroRNA-200a及其靶基因沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator1，SIRT1）在大鼠房顫纖維化模型中的表達(dá)改變，闡釋microRNA-200a mimics對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響，進(jìn)一步明確microRNA-200a在心肌纖維化過程中發(fā)揮作用的分子機(jī)制。
　　方法：
　　構(gòu)造 Sprague-Dawley大鼠房顫心肌纖維化模型采用下腹部皮下注射鹽酸異

3、丙腎上腺素的方法。隨機(jī)將80只無特定病原體級(jí)SD大鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各40只。實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行下腹部皮下注射ISO，空白組大鼠予以下腹部皮下相同量生理鹽水注射，處死取出心臟，獲得標(biāo)本。通過 LipofectamineTM2000 Reagent試劑轉(zhuǎn)染microRNA-200a mimics入體外培養(yǎng)大鼠心肌成纖維細(xì)胞，36~48 h后評(píng)估各項(xiàng)指標(biāo)。HE染色法和Masson染色法觀測(cè)各組心臟標(biāo)本中的心肌纖維化程度及膠原容積分?jǐn)?shù)（C

4、VF）；qRT-PCR法測(cè)定各組microRNA-200a、SIRT1和α-SMA的mRNA表達(dá)情況；Western blot法測(cè)定各組SIRT1和α-SMA表達(dá)；MTT法檢測(cè)microRNA-200a mimics對(duì)心肌成纖維細(xì)胞活化、增殖的影響。
　　結(jié)果：
　　兩組對(duì)比，HE染色和Masson染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組SD大鼠標(biāo)本間質(zhì)中出現(xiàn)明顯的膠原纖維增生，實(shí)驗(yàn)組心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）發(fā)生明顯的增加改變。與空白對(duì)照組

5、比較，實(shí)驗(yàn)組 microRNA-200a表達(dá)下降，SIRT1以及α-SMA mRNA水平表達(dá)增高，SIRT1以及α-SMA蛋白水平表達(dá)增高；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染microRNA-200a mimics后，與空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，microRNA-200a表達(dá)增高，SIRT1 mRNA表達(dá)水平降低；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染microRNA-200a mimics，心肌成纖維細(xì)胞活性下降。
　　結(jié)論：
　　皮下注射 ISO能使 SD大鼠心臟發(fā)生明顯的