移植肝膽管上皮細(xì)胞增殖對(duì)管周成纖維細(xì)胞活化影響的研究.pdf

1、一、目的 BEC作為一種對(duì)CPRI較為敏感的細(xì)胞，在CPRI誘導(dǎo)下發(fā)生活躍增殖，極有可能參與移植肝膽道并發(fā)癥的病理過程。本研究在建立一種適于移植肝膽道問題研究的大鼠肝移植模型基礎(chǔ)上，通過觀察CPRI誘導(dǎo)的移植肝BEC增殖對(duì)管周成纖維細(xì)胞活化的影響，旨在揭示IL-6/STAT3信號(hào)通路在移植肝膽管周圍纖維化、膽道狹窄等并發(fā)癥中的重要作用，并為新型免疫抑制劑雷帕霉素在肝移植領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供有力的理論支持。 二、方法與結(jié)果

2、 1．重建肝動(dòng)脈血供的ROLT模型的建立與評(píng)估：在經(jīng)典“雙袖套”法的基礎(chǔ)上，將供、受體肝總動(dòng)脈以改良的“Gao支架法”直接對(duì)合，重建肝動(dòng)脈血供；在此基礎(chǔ)上將供肝在4℃Uw液中分別冷保存1、12h，觀察術(shù)后14d生存率及肝內(nèi)膽管損傷的病理生理學(xué)變化。結(jié)果顯示：供肝冷保存12h術(shù)后的OLT受體鼠14d生存率為40％，肝臟損傷較重，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原纖維分布較多。 2．CPRI誘導(dǎo)的BEC增殖對(duì)管周成纖維細(xì)胞活化的影響：在

3、上述動(dòng)物模型建立的基礎(chǔ)上，觀察CPRI對(duì)移植肝BEC形態(tài)及功能方面的影響，以及BEC周圍成纖維細(xì)胞的活化情況。結(jié)果顯示，CPl2h組BEC凋亡和增殖現(xiàn)象明顯，伴以血清ALT、ALP、TBIL等酶譜升高為特征的肝功能損害和膽汁郁積征象。增殖的BEC分泌TGF-β1促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化，表現(xiàn)為BEC周圍MFB的大量聚集。 3．IL-6/STAT3信號(hào)通路對(duì)大鼠移植肝BEC增殖的調(diào)控作用：通過給予肝移植受體鼠重組人IL-6(rhIL-6

4、)和RPM處理，觀察IL-6/STAT3信號(hào)通路對(duì)BEC增殖的調(diào)控作用，以及RPM對(duì)移植肝BEC增殖的影響。結(jié)果顯示：CP12h組移植肝IL-6mRNA表達(dá)上調(diào)，BEC內(nèi)STAT3活化增加，促進(jìn)BEC增殖并伴隨著管周MFB的持續(xù)聚集。RPM作為STAT3的特異性抑制劑，通過部分阻斷細(xì)胞內(nèi)的IL-6/STAT3信號(hào)通路，抑制由CPRI誘導(dǎo)的移植肝BEC的活躍增殖，減少BEC周圍MFB的聚集，從而延緩肝移植術(shù)后膽管周圍纖維化、膽道狹窄等并發(fā)

5、癥的發(fā)展，是一種具有廣泛應(yīng)用前景的新型免疫抑制劑。 三、結(jié)論 1．在傳統(tǒng)“兩袖套法”基礎(chǔ)上，采用改良的“支架法”進(jìn)行受體肝動(dòng)脈血流重建，在此基礎(chǔ)上將供肝冷保存12h的大鼠肝移植模型是觀察膽道CPRI的理想模型。 2．供肝較長(zhǎng)時(shí)間的冷保存嚴(yán)重?fù)p傷BEC，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并發(fā)生增殖，伴隨著明顯的肝功能損害及膽汁郁積征象。增殖的BEC通過分泌TGF-β1，誘導(dǎo)膽管上皮周圍成纖維母細(xì)胞活化而發(fā)生向MFB的表型轉(zhuǎn)化，有可能是肝

6、移植術(shù)后膽管周圍纖維化、膽管狹窄等并發(fā)癥發(fā)生的關(guān)鍵因素。 3．IL-6/STAT3信號(hào)系統(tǒng)的活化可能是CPRI誘導(dǎo)的移植肝BEC活躍增殖的分子機(jī)制之一。 4．作為一種高效、低毒性的新型免疫抑制劑，RPM不僅可與其它免疫抑制劑協(xié)同應(yīng)用于器官移植領(lǐng)域，由于它能部分阻斷細(xì)胞內(nèi)的IL-6/STAT3信號(hào)通路，抑制CPRI誘導(dǎo)的移植肝BEC的過度增殖，從一個(gè)全新的角度出發(fā)，有可能為臨床防治移植肝膽管周圍纖維化、膽道狹窄等并發(fā)癥提供