褪黑素修飾超氧化物歧化酶及其性質(zhì)的初步研究.pdf

1、關(guān)于超氧化物歧化酶的化學(xué)修飾,國內(nèi)外學(xué)者已做了較多且較為深入的研究.修飾后的SOD與修飾前比較,其穩(wěn)定性大大提高,并且免疫原性降低或消除,是酶分子改造中一個(gè)較為成功的方面.該文在前人研究的基礎(chǔ)上,拓展了關(guān)于SOD化學(xué)修飾的新思路:在對(duì)SOD進(jìn)行分子改造的同時(shí),著重于擴(kuò)展其功能,使之成為具備復(fù)合型功能的酶分子.該文選用了具備清除自由基、增強(qiáng)免疫等功能的褪黑素作為修飾劑對(duì)SOD進(jìn)行改造.在自由基代謝中,SOD能夠特異性的清除超氧陰離子(O<

2、,2><'->),但是對(duì)于由O<,2><'->反應(yīng)產(chǎn)生的其他更具危害性的自由基如:·OH、ONOO<'->等卻無能為力.而MT就具備清除·OH、ONOO<'->的能力.如果能將二者結(jié)合起來,得到的MT-SOD理論上會(huì)具備更強(qiáng)的清除自由基的能力.為了將MT與SOD分子偶聯(lián),該文借鑒了免疫學(xué)中MT免疫原的制備方法.以甲醛作為偶聯(lián)劑,將MT連接到SOD分子表面的游離氨基上.由于甲醛能使SOD失活,于是對(duì)甲醛的反應(yīng)濃度進(jìn)行了篩選,結(jié)果表明選用濃

3、度為0.250g/100ml的甲醛作為偶聯(lián)劑進(jìn)行化學(xué)修飾的效果較為理想.修飾反應(yīng)完成后,用丙酮沉淀、透析等方法將反應(yīng)物分離純化,根據(jù)MT和SOD的性質(zhì)確立了一套快速檢測(cè)MT連接效率的實(shí)驗(yàn)方法,并能夠計(jì)算出每個(gè)SOD分子上連接了6-9個(gè)MT分子.通過檢測(cè),結(jié)果表明得到的MT-SOD保留了60％的SOD活性,而且1000ug/ml的MT-SOD(含60-90ug/ml的MT)清除OH的能力與70ug/ml的MT相當(dāng),表明修飾后MT的活性幾乎